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熒光標(biāo)記抗體注意事項(xiàng):
1)對熒光標(biāo)記的抗體的稀釋,要保證抗體的蛋白有一定的濃度,一般稀釋度不應(yīng)超過1:20。
2)染色的溫度和時間需要根據(jù)各種不同的標(biāo)本及抗原而變化,染色時間可以從10 min到數(shù)小時,一般30 min已足夠。
3)為了保證熒光染色的正確性,*試驗(yàn)時需設(shè)置下述對照:
① 標(biāo)本自發(fā)熒光對照:標(biāo)本加1-2滴0.01mol/L,pH7.4的PBS。
② 特異性對照(抑制試驗(yàn)):標(biāo)本加未標(biāo)記的特異性抗體,再加熒光標(biāo)記的特異性抗體。
③ 陽性對照:已知的陽性標(biāo)本加熒光標(biāo)記的特異性抗體。
4)一般標(biāo)本在高壓汞燈下照射超過3min,就有熒光減弱現(xiàn)象,經(jīng)熒光染色的標(biāo)本應(yīng)在當(dāng)天觀察。
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