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細(xì)菌轉(zhuǎn)化實驗次序

來源:上海撫生實業(yè)有限公司   2020年01月08日 15:54  

細(xì)菌轉(zhuǎn)化指某一受體細(xì)菌通過直接吸收來自另一供體細(xì)菌的含有特定基因的脫氧核糖核酸(DNA)片段,從而獲得了供體細(xì)菌的相應(yīng)遺傳性狀,這種現(xiàn)象稱為細(xì)菌轉(zhuǎn)化。自然界的轉(zhuǎn)化現(xiàn)象,一般發(fā)生在同一物種或近緣物種中。細(xì)菌轉(zhuǎn)化方法已被引入其他生物,例如采用原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化法,可將外源DNA注入到不具攝取DNA能力的生物中,使其獲得某些新的特性。
實驗步驟
1. 準(zhǔn)備平板: 每組:1塊LB平板,2塊LB/amp平板,1塊LB/amp/ara平板
2. 準(zhǔn)備感受態(tài)細(xì)胞:用250μl無菌水或轉(zhuǎn)化液懸浮試劑盒中提供的大腸桿菌菌粉,此即感受態(tài)細(xì)胞。
3. 活化受體細(xì)胞:挑取1環(huán)E.coli K12 HB101菌液,于LB培養(yǎng)基上37℃活化16-24h。 
4. 轉(zhuǎn)化:1)在兩只無菌離心管上分別標(biāo) 
記+DNA, -DNA。 2)在上述兩管中分別加入 250μl轉(zhuǎn)化液。 3) 迅速置于冰上。 4)各挑取活化好的受體菌的一 個單菌落,懸浮于兩管轉(zhuǎn)化液中。 5)在標(biāo)有+DNA的管中加入一 環(huán)質(zhì)粒DNA,而標(biāo)有-DNA的管中不加。 6)細(xì)菌轉(zhuǎn)化將上述兩管于冰上放置10min。7)在準(zhǔn)備好的培養(yǎng)基底部如左圖。

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