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樣本收集與前處理:
紅細(xì)胞:需按照試劑盒中說(shuō)明書(shū)上紅細(xì)胞的測(cè)定方法進(jìn)行提取后測(cè)定。
動(dòng)物組織樣本:可用生理鹽水按重量體積比制備成組織勻漿液,離心取上清測(cè)定。
培養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)菌、植物組織:常用PBS作為勻漿介質(zhì)破碎后離心取上清測(cè)定。
使用本試劑盒中的ATP檢測(cè)裂解液裂解獲得的細(xì)胞或組織樣品,不僅可以用于ATP檢測(cè),還可用于檢測(cè)蛋白濃度、進(jìn)行SDS-PAGE或一些常規(guī)的較易溶解蛋白的Western檢測(cè)。
本試劑盒的使用方便快捷,通常10-20個(gè)樣品可以在30-60分鐘內(nèi)測(cè)定完畢。
本ATP檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)靈敏度低于S0027,但高于S0026B;本試劑盒對(duì)于一些特殊樣品的兼容性低于S0026B。
ATP(adenosine 5'-triphosphate)水平。細(xì)胞和組織樣品一步裂解即可完成樣品制備,檢測(cè)靈敏度高達(dá)1nmol/L,化學(xué)發(fā)光可以持續(xù)穩(wěn)定達(dá)30分鐘,并且獲得的樣品還可以同時(shí)進(jìn)行Western檢測(cè)。
ATP,作為重要的能量分子在細(xì)胞的各種生理、病理過(guò)程中起著重要作用。ATP水平的改變,會(huì)影響細(xì)胞的功能。通常細(xì)胞在凋亡、壞死或處于一些毒性狀態(tài)下,ATP水平會(huì)下降,而高葡萄糖刺激等對(duì)于一些細(xì)胞可以上調(diào)細(xì)胞內(nèi)ATP水平。通常ATP水平的下降表明線粒體的功能受損或下降,在細(xì)胞凋亡時(shí)ATP水平的下降通常和線粒體的膜電位下降同時(shí)發(fā)生。
樣品制備非常簡(jiǎn)單。本試劑盒提供了可以用于細(xì)胞和組織裂解的ATP檢測(cè)裂解液,簡(jiǎn)單裂解后即可用于ATP檢測(cè)。無(wú)需進(jìn)行高氯酸或(TCA)抽提,或樣品裂解后的煮沸等繁瑣操作。
本試劑盒進(jìn)行了特殊的優(yōu)化設(shè)計(jì),使檢測(cè)ATP時(shí)的化學(xué)發(fā)光非常穩(wěn)定。對(duì)于ATP標(biāo)準(zhǔn)曲線的檢測(cè)結(jié)果顯示,在開(kāi)始反應(yīng)后10分鐘內(nèi)化學(xué)發(fā)光無(wú)明顯下降,開(kāi)始反應(yīng)后30分鐘內(nèi)化學(xué)發(fā)光的下降不超過(guò)10%。
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