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TSZelisa試劑盒土壤樣品含有大量的微生物,其中絕大部分的微生物都是無法直接培養(yǎng)進(jìn)行繁殖和研究。從土壤樣品中提取DNA是研究土壤微生物zui為有效的方法。目前從土壤樣品中提取微生物DNA的方法主要有直接法和間接法。直接法是指把土壤樣品放在裂解液中,經(jīng)過有效的破壁方法使微生物的DNA全部釋放到裂解液中,然后再進(jìn)行分離提取。間接法是指將土壤放在一種的緩沖液中,把微生物從土壤中分離出來,然后再進(jìn)行DNA的提取。間接法可大大降低土壤中腐殖酸,重金屬鹽對DNA提取帶來的影響,但是這種方法會丟失許多微生物,得到的DNA并非土壤樣品中的全基因組(宏基因組),目前已經(jīng)很少研究者會采用這種方法。
從土壤樣品中直接提取DNA可zui大可能性地獲得全基因組,TSZelisa試劑盒土壤DNA提取操作方法:
1.取0.5g森林土壤/耕地土壤,或4g礦石區(qū)土壤和有機(jī)物污染土壤至15ml離心管中;
2.加入0.5g酸洗玻璃珠,或4g酸洗玻璃珠;
3.立即在渦旋儀上zui高速渦旋3分鐘。
4.加入100ul ,或800ul Buffer DS,渦旋15s混勻
5.轉(zhuǎn)移至預(yù)熱至70oC水浴鍋中,水浴10-15分鐘。
6.3000 x g離心3分鐘,轉(zhuǎn)移800ul,或7 ml 上清,并加入270ul Buffer SP2或2.3 ml Buffer SP2,渦旋混勻;
7.10,000 x g離心5分鐘,或5,000 x g離心10分鐘;
8.把上清液轉(zhuǎn)稱至新的2ml/15ml離心管中,加入0.7倍的異丙醇。(在處理礦石區(qū)樣品時和有機(jī)物污染的樣品中,還加入133ul糖原溶液),渦旋混勻;
9.10,000 x g離心5分鐘,或5,000 x g離心10分鐘沉淀收集DNA。
10.倒棄上清液,并反扣于吸水紙上5分鐘;
11.加入200 ul Elution Buffer,渦旋5秒。 65℃水浴20-60分鐘,讓DNA充分溶液。
12.加入50ul HTR,反應(yīng)2min后,離心,取上清。
13.上清加入等體積(約200ul) XP2 Buffer,均勻后上柱。
14.加入300ul XP2 Buffer,洗滌一次。
15.加入700ul SPW Wash Buffer,洗滌兩次。
16.空甩后,加入適當(dāng)量的Elution Buffer洗脫即可。
TSZelisa試劑盒
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