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蛋白質(zhì)在PH等于等電點(diǎn)時(shí)，溶解度zui小。本文主要介紹了利用沉淀實(shí)驗(yàn)測(cè)定蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的實(shí)驗(yàn)原理、器材、試劑和具體操作步驟。
 

蛋白質(zhì)PH位于等電點(diǎn)時(shí)溶解度zui低

一、蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的測(cè)定

1、目的

(1)了解蛋白質(zhì)的兩性解離性質(zhì)。

(2)學(xué)習(xí)測(cè)定蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的一種方法。

2、原理

蛋白質(zhì)是兩性電解質(zhì)。蛋白質(zhì)分子的解離狀態(tài)和解離程度受溶液的酸堿 度影響。當(dāng)溶液的pH 達(dá)到一定數(shù)值時(shí)，蛋白質(zhì)顆粒上正負(fù)電荷的數(shù)目相等， 在電場(chǎng)中，蛋白質(zhì)既不向陰極移動(dòng)，也不向陽(yáng)極移動(dòng)，此時(shí)溶液的pH 值稱 為此種蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)。不同蛋白質(zhì)各有其特異的等電點(diǎn)。在等電點(diǎn)時(shí)，蛋 白質(zhì)的理化性質(zhì)都有變化，可利用此種性質(zhì)的變化測(cè)定各種蛋白質(zhì)的等電 點(diǎn)。zui常用的方法是測(cè)其溶解度zui低時(shí)的溶液pH 值。

本實(shí)驗(yàn)借觀察在不同pH 溶液中的溶解度以測(cè)定酪蛋白的等電點(diǎn)。用醋 酸與醋酸鈉(醋酸鈉混合在酪蛋白溶液中)配制成各種不同pH 值的緩沖液。 向諸緩沖溶液中加入酪蛋白后，沉淀出現(xiàn)zui多的緩沖液的pH 值即為酪蛋白 的等電點(diǎn)。

3、器材

(1)水浴鍋(2)溫度計(jì)(3)200mL 錐形瓶

(4)100mL 容量瓶(5)吸管(6)試管

(7)試管架(8)乳缽

4、試劑

(1)0.4%酪蛋白醋酸鈉溶液200mL

取0.4g 酪蛋白，加少量水在乳缽中仔細(xì)地研磨，將所得的蛋白質(zhì)懸膠 液移入200 mL 錐形瓶?jī)?nèi)，用少量40～50℃的溫水先洗滌乳缽，將洗滌液也 移入錐形瓶?jī)?nèi)。加入10mL1mol/L 醋酸鈉溶液。把錐形瓶放入到50℃水浴中， 并小心地旋轉(zhuǎn)錐形瓶，直到酪蛋白*溶解為止。將錐形瓶?jī)?nèi)的溶液全部移 至100mL 容量瓶?jī)?nèi)，加水至刻度，塞緊玻塞，混勻。

(2) 1.00mol/L 醋酸溶液100mL

(3)0.10mol/L 醋酸溶液100mL

(4)0.01mol/L 醋酸溶液50mL

5、操作

(1)取同樣規(guī)格的試管4 支，按下表順序分別地加入各試劑，然后混勻①。

(2)向以上試管中各加酪蛋白的醋酸鈉溶液1mL,加一管,搖勻一管。此時(shí)1、 2、3、4 管的pH 依次為5.9、5.3、4.7、3.5。觀察其混濁度。靜置10 分 鐘后，再觀察其混濁度。zui混濁的一管的pH 即為酪蛋白的等電點(diǎn)。

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