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癥狀

(一)保留時(shí)間變化

可能的原因 : 解 決 方 法

1.柱溫變化 : 柱恒溫
2.等度與梯度間未能充分平衡 : 至少用10倍柱體積的流動(dòng)相平衡柱
3.緩沖液容量不夠 : 用>25mmol/L的緩沖液
4.柱污染 : 每天沖洗柱
5.柱內(nèi)條件變化 : 穩(wěn)定進(jìn)樣條件,調(diào)節(jié)流動(dòng)相
6.柱快達(dá)到壽命 : 采用保護(hù)柱

(二)保留時(shí)間縮短

可能的原因 : 解 決 方 法

1.流速增加 : 檢查泵,重新設(shè)定流速
2.樣品超載 : 降低樣品量
3.鍵合相流失 : 流動(dòng)相PH值保持在3~7.5檢查柱的方向
4.流動(dòng)相組成變化 : 防止流動(dòng)相蒸發(fā)或沉淀
5.溫度增加 : 柱恒溫

(三)保留時(shí)間延長(zhǎng)

可能的原因 : 解 決 方 法

1.流速下降 : 管路泄漏,更換泵密封圈,排除泵內(nèi)氣泡
2.硅膠柱上活性點(diǎn)變化 : 用流動(dòng)相改性劑,如加三乙胺,或采用堿至鈍化柱
3.鍵合相流失 : 同前(二)3
4.流動(dòng)相組成變化 : 同前(二)4
5.溫度降低 : 同前(二)5

(四)出現(xiàn)肩峰或分叉

可能的原因 : 解 決 方 法

1.樣品體積過(guò)大 : 用流動(dòng)相配樣,總的樣品體積小于*峰的15%
2.樣品溶劑過(guò)強(qiáng) : 采用較弱的樣品溶劑
3.柱塌陷或形成短路通道 : 更換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件
4.柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效 : 更換燒結(jié)不銹鋼,加在線過(guò)濾器,過(guò)濾樣品
5.進(jìn)樣器損壞 : 更換進(jìn)樣器轉(zhuǎn)子

(五)鬼峰

可能的原因 : 解 決 方 法

1.進(jìn)樣閥殘余峰 : 每次用后用強(qiáng)溶劑清洗閥,改進(jìn)閥和樣品的清洗
2.樣品中未知物 : 處理樣品
3.柱未平衡 : 重新平衡柱,用流動(dòng)相作樣品溶劑 (尤其是離子對(duì)色譜)
4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽譜) : 每天新配,用抗氧化劑
5.水污染(反相) : 通過(guò)變化平衡時(shí)間檢查水質(zhì)量，用HPLC級(jí)的水

(六)基線噪聲

可能的原因 : 解 決 方 法

1.氣泡(尖銳峰) : 流動(dòng)相脫氣,加柱后背壓
2.污染(隨機(jī)噪聲) : 清洗柱,凈化樣品,用HPLC級(jí)試劑
3.檢測(cè)器燈連續(xù)噪聲 : 更換氘燈
4.電干擾(偶然噪聲) : 采用穩(wěn)壓電源,檢查干擾的來(lái)源(如水浴等)
5.檢測(cè)器中有氣泡 : 流動(dòng)相脫氣,加柱后背壓

(七)峰拖尾

可能的原因 : 解 決 方 法

1.柱超載 : 降低樣品量,增加柱直徑采用較高容量的固定相
2.峰干擾 : 清潔樣品,調(diào)整流動(dòng)相
3.硅羥基作用 加三乙胺,用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動(dòng)相PH值,鈍化樣品
4.同前(四)4 : 同前(四)4
5.同前(四)3 5. : 同前(四)3
6.死體積或柱外體積過(guò)大 : 連接點(diǎn)降至zui低,對(duì)所有連接點(diǎn)作合適調(diào)整,盡可能采用細(xì)內(nèi)徑的連接管
7.柱效下降 : 用較低腐蝕條件,更換柱,采用保護(hù)柱

(八)峰展寬

可能的原因 : 解 決 方 法

1.進(jìn)樣體積過(guò)大 : 同(四)1
2.在進(jìn)樣閥中造成峰擴(kuò)展 : 進(jìn)樣前后排出氣泡以降低擴(kuò)散
3.數(shù)據(jù)系統(tǒng)采樣速率太慢 : 設(shè)定速率應(yīng)是每峰大于10點(diǎn)
4.檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)過(guò)大 : 設(shè)定時(shí)間常數(shù)為感興趣*峰半寬的10%
5.流動(dòng)相粘度過(guò)高 : 增加柱溫,采用低粘度流動(dòng)相
6.檢測(cè)池體積過(guò)大 : 用小體積池,卸下熱交換器
7.保留時(shí)間過(guò)長(zhǎng) : 等度洗脫時(shí)增加溶劑含量也可用梯度洗脫
8.柱外體積過(guò)大 : 將連接管徑和連接管長(zhǎng)度降至zui小
9.樣品過(guò)載 : 進(jìn)小濃度小體積樣品