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1、液相色譜是如何實(shí)現(xiàn)、快速、靈敏的?

　　解：氣相色譜理論和技術(shù)上的成就為液相色譜的發(fā)展創(chuàng)造條件，從它的、高速和高靈敏渡得到啟發(fā)，采用5一10四微粒出定相以提高柱效，采用高壓泵加快液體流動(dòng)相的流速;設(shè)計(jì)高靈敏度、死體積小的紫外、熒光等檢測(cè)器，提高檢測(cè)靈敏度，克服經(jīng)典液相色譜曲缺點(diǎn)，從而達(dá)到、快速、靈敏。

　　2、與氣相色譜法相比液相色譜有哪些優(yōu)點(diǎn)和不足?

　　解：氣相色譜的分析對(duì)象是在校溫下具有一定的揮發(fā)性、對(duì)熱穩(wěn)定購(gòu)物質(zhì)。因此它只限于分析氣體和沸點(diǎn)低的化合物或揮發(fā)性的衍生物。而液相色譜由于以液體作為流動(dòng)相，只要被分析的物質(zhì)在選用的流動(dòng)相中有一定的按解度，便可以分析，所以適用性廣，不受樣品揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制，特別適合于那些沸點(diǎn)高、極性強(qiáng)、熱穩(wěn)定性差的化合物，例如，生化物質(zhì)和藥物、離子型化合物、熱穩(wěn)定性差的天然產(chǎn)物等。在目前已知的有機(jī)化臺(tái)物中，

　　只有20%樣品可不經(jīng)化學(xué)處理而能滿意地用氣相色譜分離，80%的有機(jī)化合物要用液相色譜分析。

　　氣相色譜中流動(dòng)相是惰性的，它對(duì)組分沒(méi)有作用力，僅起運(yùn)載作用、而液相色譜的流動(dòng)相不僅起運(yùn)載作用，而且流動(dòng)相對(duì)組分有一定親合力，可以通過(guò)改變流動(dòng)相種類(lèi)和組成提高分離的選擇性，另外可作流動(dòng)相的化合物多，選擇余地廣。

　　與氣相色譜相比，液相色譜的另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是樣品的回收比較容易，只要開(kāi)口容器放在柱子末端，就可以很容易地將所分離的各組分收集?；厥帐嵌康模梢杂脕?lái)提純和制備具有足夠純度的單一物質(zhì)。

　　液相色譜不足的是，日前檢測(cè)器的靈敏度不及氣相色譜。必須特別注意“柱外效應(yīng)”對(duì)柱效率及色譜分離的影響。

　　3、試比較氣相色譜與液相色譜的H-u曲線，分析產(chǎn)生不同的原因。

　　解：從圖可看出，氣相色譜和液相色譜得到的H-u曲線，形狀迥然不同，流動(dòng)相的流速對(duì)柱效的影響也不一樣，在氣相色譜的H-u曲線上，塔板高度H隨u變化呈雙曲線.曲線有一zui低點(diǎn)，這時(shí)柱效zui高，板高zui小，流速*。而液相色譜H-u曲線，未出現(xiàn)流速降低板高增加的現(xiàn)象，由于*流速趨近于零，一般觀察不到zui低板高相對(duì)應(yīng)的*流速。在正常的情況下，流速降低，板高H總是降低的，這與氣相色譜明顯不同。在氣相色譜中流動(dòng)相流速增大，柱效呈直線降低，而在液相色譜中，流動(dòng)相流速增大，柱效平緩降低。其主要原因是液相色譜的流動(dòng)相為液體，液相的擴(kuò)散系數(shù)Dm很小，通常僅為氣相擴(kuò)散系數(shù)的104~105分之一，所以分子擴(kuò)散項(xiàng)在低u時(shí)也不起多大作用、因此液相色譜H-u曲線未能出現(xiàn)流速降低，板高增加現(xiàn)象。到高速時(shí)，雖然柱內(nèi)線速提高，但固定相和流動(dòng)相的傳質(zhì)都能很快進(jìn)行，故H-u曲線上升緩慢。

　　4、簡(jiǎn)述液相色譜中引起色譜峰擴(kuò)展的主要因素，如何減少諳帶擴(kuò)張、提高柱效?

　　解：液相色譜中引起色諾峰擴(kuò)展的主要因素為渦流擴(kuò)散、流動(dòng)相傳質(zhì)、停留流動(dòng)相傳質(zhì)及柱外效應(yīng)。

　　在液相色譜中要減小譜帶擴(kuò)張，提高柱效，要減少續(xù)料顆粒直徑，減小境料孔穴深度，提高裝填的均勻性，采用低粘度溶劑作流動(dòng)相，流速盡可能低，同時(shí)要盡可能采用死體積較小的進(jìn)樣器、檢測(cè)器、接頭和傳輸管線等。

　　5、為什么要提出折合參數(shù)?有何特點(diǎn)?

　　解：我們知道色譜操作條件對(duì)板高是有影響的.Giddings發(fā)現(xiàn)，固定相相同，填充良好，共是粒度dp不同，因而H-u曲線不同，在液相色譜中，培板高度是粒度的函數(shù)，為了比較不向色譜條件下的板高H.提出折合參數(shù)，包括折合板高、折合流速、折合柱長(zhǎng)。其特點(diǎn)是對(duì)于不同粒度的填料能得到相同的H—ur 曲線，因此可以在相同的條件下比較不同填料的柱效。

　　6、色譜柱A長(zhǎng)度為15cm，載體粒度為5m.另一B柱長(zhǎng)為30cm，載體粒度為10m，兩柱的柱效相等嗎?

　　解：A柱的折合柱長(zhǎng)為30000，B柱的折合柱長(zhǎng)也為30000，表明組分在兩根柱內(nèi)從柱人口到出口都經(jīng)過(guò)30000個(gè)載體顆粒.兩校的柱效相等。

　　7、何謂梯度淋洗，適用于哪些樣品的分析?與程序升溫有什么不同?

　　解：梯度淋洗就是在分離過(guò)程中.讓流動(dòng)相的組成、極性、pH值等按‘定程序連續(xù)變化。使樣品中各組分能在*的k下出峰。使保留時(shí)間短、擁擠不堪、甚至重疊的組分，保留時(shí)間過(guò)長(zhǎng)而峰形扁平的組分獲得很好的分離，特別適合樣品中組分的k值范圍很寬的復(fù)雜樣品的分析。梯度淋洗十分類(lèi)似氣相色譜的程序升溫，兩者的目的相同。不同的是程序升溫是通過(guò)程序改變柱溫。而液相色譜是通過(guò)改變流動(dòng)相組成、極性、pH值來(lái)達(dá)到改變k的目的。

　　8、流動(dòng)相為什么要預(yù)先脫氣?常用的脫氣方法有哪幾種?

　　解：流動(dòng)相中溶解氣體存在以下幾個(gè)方面的害處，氣泡進(jìn)入檢測(cè)器，引起光吸收成電信號(hào)的變化，基線突然跳動(dòng)，干擾檢測(cè);溶解在溶劑中的氣體進(jìn)入色譜柱時(shí)，可能與流動(dòng)相或固定相發(fā)生化學(xué)反應(yīng);溶解氣體還會(huì)引起某些樣品的氧化降解.對(duì)分離和分析結(jié)果帶來(lái)誤差。因此，使用前必須進(jìn)行脫氣處理。常用的脫氣法有以下幾種：(1)加熱脫氣法;(2)抽吸脫氣法;(3)吹氦脫氣法;(4)超聲波振蕩脫氣法。

　　9、按固定相孔徑大小分類(lèi)，液相色譜固定相有哪幾類(lèi)?各有什么特性及適用范圍?

　　解：從固定相的孔隙深度考慮，液相色譜固定相分為表面多孔型(薄殼型)和全多孔型(全孔型)兩類(lèi)。

　　表面多孔型固定相多孔層厚度小.孔淺，相對(duì)死體積小，出峰迅速，柱效高，顆粒較大，滲透性好，由于孔淺，梯度淋洗時(shí)，當(dāng)流動(dòng)相成分改變后.孔內(nèi)外流動(dòng)相成分能迅速達(dá)到平衡，機(jī)械強(qiáng)度高，裝柱容易，其不足的是由于多孔層厚度小，因而柱容量小，zui大允許樣品量受到限制，適用于比較簡(jiǎn)單的樣品分析及快速分析。

　　全多孔型固定相，由于顆粒很細(xì)，孔仍然很淺.傳質(zhì)速度較快，柱效高。梯度淋洗時(shí)孔內(nèi)外流動(dòng)相成分的平衡速度仍然較快.其zui大特點(diǎn)是柱容量大，zui大允許樣品量是表面多孔型的5倍，但裝填的什于滲透性低，因而需要更高的操作壓力.制柱比表面多孔型的難。這種固定相特別有利于痕量組分及多組分復(fù)雜混合物的分離分析。

　　10、什么叫化學(xué)鍵合色譜? 與液—液色譜相比有何優(yōu)點(diǎn)?

　　解：通過(guò)化學(xué)反應(yīng)，將固定液鍵合到載體表面，此種固定相稱為化學(xué)鍵合固定相;采用化學(xué)鍵合固定相的色譜法，稱為化學(xué)鍵合色譜。

　　與液—液分配色譜相比，鍵合色譜法的主要優(yōu)點(diǎn)：(1)化學(xué)鍵合固定相非常穩(wěn)定，在使用過(guò)程中不流失。(2)適宜用梯度淋洗。(3)適合于k范圍很寬的樣品。(4)由于鍵合到載體表面官能團(tuán)，既可是非極性的，也可是極性的，因此應(yīng)用面廣。