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氯地霜是以*和醋酸*為主藥，以硬脂酸、單硬脂酸甘油酯、硬石蠟、凡士林、液體石蠟、甘油、三乙醇胺、尼泊金乙酯等為基質(zhì)的乳劑型基質(zhì)乳膏，臨床上主要用于皮炎、濕疹、脂溢性皮炎、痤瘡等癥，效果良好。由于組分含量差別懸殊，基質(zhì)成分干擾嚴(yán)重，紫外分光光度法［1］很難進(jìn)行分離和測(cè)定，雙波長(zhǎng)等［2～4］計(jì)算分光光度法測(cè)定又存在霜?jiǎng)┗|(zhì)成分復(fù)雜，組分質(zhì)量時(shí)有差異，測(cè)定結(jié)果誤差較大的問(wèn)題。本文經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)研究，選用了專(zhuān)屬性較強(qiáng)的HPLC方法測(cè)定乳劑中*和醋酸*的含量，獲得了比較理想的結(jié)果。
1　儀器與試藥
　　STI5000型液相色譜泵、UV5000型紫外檢測(cè)器。
*、醋酸*對(duì)照品均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所；氯地霜樣品及空白基質(zhì)由柳州市皮防站提供；甲醇為AR級(jí)。
2　色譜條件
　　色譜柱：PE-C18（150 mm×4.6 mm,5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-水（70∶30），流速：0.5mL.min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：240 nm；靈敏度：0.0UFS；紙速：8 mm.min-1。
3　對(duì)照品貯備溶液的制備
　　精密稱(chēng)取*和醋酸*對(duì)照品適量，用甲醇溶解并稀釋成含量分別為20 mg.mL-1和0.25mg.mL-1的混合溶液，搖勻。
4　系統(tǒng)適用性試驗(yàn)
　　精密量取對(duì)照品貯備液2.5 mL，置50 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，在選定的色譜條件下，精密量取對(duì)照品溶液5μL進(jìn)樣，色譜圖見(jiàn)圖1-A，*和醋酸*的保留時(shí)間分別為3.90、10.68min；理論板數(shù)分別為2455、3950；二者的分離度為13.6。
氯地霜樣品預(yù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：在*和醋酸*拖尾峰（tailingpeak）。前者少見(jiàn)。>色譜峰之間，比對(duì)照品色譜圖多1個(gè)色譜峰，為基質(zhì)中易溶于醇的尼泊金乙酯峰［5］，保留時(shí)間為5.53min，見(jiàn)圖1-B。該尼泊金乙酯峰與*的分離度為5.1，與醋酸*的分離度為10.3。此結(jié)果表明：在本文選定的色譜條件下，柱效和各峰之間的分離度均達(dá)到了實(shí)驗(yàn)要求。
圖1　*和醋酸*（A）及其乳膏（B）、基質(zhì)（C）的色譜圖
1.*　2.醋酸*　3.尼泊金乙酯
5　線(xiàn)性試驗(yàn)
　　精密量取對(duì)照品貯備溶液1.5、2.0、2.5、3.0、3.5 mL，分別置于50mL量瓶中，用甲醇稀釋定容，在上述色譜條件下，分別進(jìn)樣5 μL，記錄基線(xiàn)構(gòu)成之面積稱(chēng)峰面積。A＝×σ×h＝2.507σh＝1.064Wh/2h>峰面積。以組分峰面積X對(duì)濃度Y回歸，得*及醋酸*的線(xiàn)性回歸方程分別為：
Y=5.1657+1.6568×10-4X　r=0.9997
Y=1.1605×10-1+4.7525×10-5X　r=0.9998
線(xiàn)性范圍分別為600.0～1400.0、7.5～17.5 μg.mL-1。
6　樣品測(cè)定
　　取本品適量（約相當(dāng)于*50 mg，醋酸*0.625 mg），精密稱(chēng)定，置小燒杯中，加甲醇適量，置80 ℃水浴中加熱2min，如此反復(fù)提取3次，放冷，過(guò)濾至50 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，置水浴中冷卻2h以上，取出后迅速濾過(guò)，棄去初濾液，取續(xù)濾液作為供試品溶液。取含*1 mg.mL-1、醋酸*12.5μg.mL-1的對(duì)照品溶液和樣品溶液各5 μL，分別注入液相色譜儀，記錄峰面積，外標(biāo)法計(jì)算2種成分在乳膏中的含量，
7　加樣回收試驗(yàn)
精密稱(chēng)取已知含量的乳膏樣品適量（約相當(dāng)于*50 mg、醋酸*0.625 mg），分別精密加*對(duì)照品40、50、60mg；醋酸*對(duì)照液（0.25 mg.mL-1）2.0、2.5、3.0 mL，按樣品含量測(cè)定項(xiàng)下方法提取，置100mL量瓶中，并依法進(jìn)行色譜測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表2
表2　回收率測(cè)定結(jié)果（n=5）