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碧云天 BeyoRT™ III M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶

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產(chǎn)品型號(hào)D7176S

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所  在  地北京市

更新時(shí)間:2023-02-20 16:51:44瀏覽次數(shù):189次

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碧云天 BeyoRT™ III M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶,即BeyoRT™ III M-MLV reverse transcriptase,是一種經(jīng)過(guò)改造和優(yōu)化的快速高效(短至10min完成反轉(zhuǎn)錄)、熱穩(wěn)定(高達(dá)55℃)、高精確度、產(chǎn)物超長(zhǎng)(長(zhǎng)達(dá)12kb)的反轉(zhuǎn)錄酶,具有正常的依賴于RNA或DNA模板的DNA聚合酶活性,能夠以RNA或DNA為模板,在引物存在的情況下進(jìn)行互補(bǔ)DNA鏈的合成,即可以進(jìn)行
產(chǎn)品編號(hào)產(chǎn)品名稱產(chǎn)品包裝產(chǎn)品價(jià)格
D7176SBeyoRT™ III M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶10KU130.00元
D7176MBeyoRT™ III M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶50KU505.00元
D7176LBeyoRT™ III M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶200KU1671.00元

碧云天 BeyoRT™ III M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶,即BeyoRT™ III M-MLV reverse transcriptase,是一種經(jīng)過(guò)改造和優(yōu)化的快速高效(短至10min完成反轉(zhuǎn)錄)、熱穩(wěn)定(高達(dá)55℃)、高精確度、產(chǎn)物超長(zhǎng)(長(zhǎng)達(dá)12kb)的反轉(zhuǎn)錄酶,具有正常的依賴于RNA或DNA模板的DNA聚合酶活性,能夠以RNA或DNA為模板,在引物存在的情況下進(jìn)行互補(bǔ)DNA鏈的合成,即可以進(jìn)行cDNA(complementary DNA)的第一鏈合成。同時(shí)本反轉(zhuǎn)錄酶保留了RNase H活性,能選擇性剪切RNA和DNA雜合雙鏈中的RNA,有利于后續(xù)cDNA第二鏈的合成。
本產(chǎn)品是常用的優(yōu)質(zhì)反轉(zhuǎn)錄酶之一,廣泛用于獲得總RNA或mRNA后cDNA第一條鏈的合成,后續(xù)可以用于PCR、real-time PCR也稱定量PCR(quantitative PCR, qPCR)、cDNA的第二鏈合成以及cDNA文庫(kù)的構(gòu)建,尤其是逆轉(zhuǎn)錄所得目的基因的克隆等。BeyoRT™ III M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶還可以通過(guò)反轉(zhuǎn)錄用于DNA探針的熒光或同位素標(biāo)記等,也可以通過(guò)引物延伸(primer extension)來(lái)分析和研究RNA。
M-MLV (Moloney Murine Leukemia Virus),也稱MMLV或M-MuLV;反轉(zhuǎn)錄酶(reverse transcriptase)也稱逆轉(zhuǎn)錄酶或RT酶。
本產(chǎn)品反轉(zhuǎn)錄快速高效,普通反轉(zhuǎn)錄僅需10min。實(shí)測(cè)小于3kb的片段,42℃反轉(zhuǎn)錄10min即可完成,與反轉(zhuǎn)錄60min相比無(wú)顯著差別。大于3kb的片段,特別是大于6kb的片段,推薦反轉(zhuǎn)錄60min,以獲得最佳的反轉(zhuǎn)錄效果。
本產(chǎn)品反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物長(zhǎng)度超長(zhǎng)。本產(chǎn)品經(jīng)測(cè)試可以輕松完成長(zhǎng)度為8 kb以下基因的反轉(zhuǎn)錄(參考圖1),反轉(zhuǎn)錄的最大長(zhǎng)度可以達(dá)到12 kb。

圖1. 使用BeyoRT™ III M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄總RNA后,對(duì)于不同長(zhǎng)度的cDNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增后的電泳效果圖。圖中可見(jiàn)0.2-12kb的cDNA可以非常高效地被反轉(zhuǎn)錄。

本產(chǎn)品熱穩(wěn)定性好,反轉(zhuǎn)錄效率高。本產(chǎn)品最適反應(yīng)溫度為42℃,當(dāng)溫度達(dá)到50℃時(shí)仍具有很高活性,對(duì)于長(zhǎng)度較短的cDNA反轉(zhuǎn)錄,溫度達(dá)到55℃時(shí)也可獲得較高產(chǎn)量的cDNA。高溫反轉(zhuǎn)錄對(duì)于高GC含量RNA的反轉(zhuǎn)錄,能有效減少二級(jí)結(jié)構(gòu),提升反轉(zhuǎn)錄效率。本產(chǎn)品反轉(zhuǎn)錄速度快,6kb以下的cDNA反轉(zhuǎn)錄只需0.5h即可完成,3kb以下的cDNA反轉(zhuǎn)錄10min即可完成(參考圖2)。

圖2. BeyoRT™ III M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶在不同溫度反應(yīng)不同時(shí)間的反轉(zhuǎn)錄效果。從HEK293T細(xì)胞抽提獲得的總RNA 2µg,在20μl反轉(zhuǎn)錄體系中按照?qǐng)D中所示溫度、時(shí)間進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄。反轉(zhuǎn)錄后取1μl反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物進(jìn)行目的基因(2.6kb的YWHAZ基因和6.0kb的ADAR1基因)的PCR擴(kuò)增和電泳。

本產(chǎn)品性價(jià)比高。BeyoRT™ III M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶是一種大腸桿菌重組高表達(dá)的反轉(zhuǎn)錄酶,由于其表達(dá)量非常高,大大提高了本產(chǎn)品的性價(jià)比。本反轉(zhuǎn)錄酶為表達(dá)含有從Moloney Murine Leukemia Virus reverse transcriptase基因克隆的pol基因,并進(jìn)行了多個(gè)突變優(yōu)化以提高其熱穩(wěn)定性、反轉(zhuǎn)錄效率、反轉(zhuǎn)錄長(zhǎng)度和表達(dá)量。
酶活性定義:One unit of the enzyme incorporates 1 nmol of dTTP into acid-precipitable material in 10 min at 37℃ using poly(A)•oligo(dT)12-18 as template-primer。反應(yīng)體系為 50 mM Tris-HCl(pH 8.3), 75 mM KCl, 3 mM MgCl2, 10 mM DTT, 0.5mM [3H]-dTTP and 0.4 mM polyA•oligo(dT)12-18。
純度:不含DNA內(nèi)切酶、外切酶和磷酸酯酶和RNA酶,可以滿足常規(guī)反轉(zhuǎn)錄合成cDNA第一條鏈等的需要。
酶儲(chǔ)存溶液:20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 100 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0.01%(v/v)
NP-40 and 50%(v/v) glycerol。
失活或抑制:80℃孵育10分鐘可以導(dǎo)致BeyoRT™ III M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶失活;EDTA、EGTA等螯合劑、無(wú)機(jī)磷酸鹽或焦磷酸鹽以及聚氨(polyamine)對(duì)BeyoRT™ III M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶有抑制作用。
本產(chǎn)品中M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶的濃度為200U/µl,用于體積為20μl的反轉(zhuǎn)錄體系時(shí),本試劑盒的不同包裝足夠分別進(jìn)行50次、250次和1000次反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。
包裝清單:

產(chǎn)品編號(hào)產(chǎn)品名稱包裝
D7176S-1BeyoRT™ III M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶50μl
D7176S-2Reaction Buffer (5X)0.3ml
說(shuō)明書(shū)1份

保存條件:
-20℃保存。
注意事項(xiàng): 
對(duì)于GC含量比較高的RNA的反轉(zhuǎn)錄,產(chǎn)品的使用說(shuō)明中給予了特別說(shuō)明,請(qǐng)予以關(guān)注。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

碧云天 BeyoRT™ III M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶

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