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小鼠破骨細胞*培養(yǎng)基操作方法

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更新時間:2017-08-08 17:06:03瀏覽次數(shù):243次

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產(chǎn)地 進口 加工定制
適用領(lǐng)域 科研
小鼠破骨細胞*培養(yǎng)基操作方法,冷凍保存方法一:冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽*儲存。

產(chǎn)品名稱:小鼠破骨細胞*培養(yǎng)基操作方法
英文名稱:Mouse osteoclastmediumbone cells
規(guī)格:100mL
產(chǎn)品貨號:FS-X0509
小鼠破骨細胞*培養(yǎng)基操作方法的運輸和保存
視天氣狀況和運輸距離遠近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸;收到細胞后請盡快解凍復(fù)蘇細胞進行培養(yǎng),如無法立刻進行復(fù)蘇操作,凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進行常溫運輸;收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài),如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作,如懸浮的細胞較多,請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
收到后的處理:
1)收到細胞后,請檢查是否漏液,如果漏液,請拍照片發(fā)給我們。
2)請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài),去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
3)棄去T25瓶中的培養(yǎng)基,添加6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
4)如果細胞長滿(90%以上)請及時進行細胞傳代,傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
5)接到細胞次日,請檢查細胞是否污染,若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染,請及時與我們?nèi)〉?/a>。

小鼠破骨細胞*培養(yǎng)基操作方法培養(yǎng)操作流程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備F-12K培養(yǎng)基(F-12K,GIBCO,貨號21127-022),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二.細胞處理:
1) 復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混 合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換 液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
1.棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3ml此細胞的培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打后吸出,移入15ml離心管中,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.移入到事先準備好的含有5ml培養(yǎng)基的T-25培養(yǎng)瓶中或含有14ml培養(yǎng)基的T-75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面T25瓶為例;
      1,細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗一遍后加入1ml*,細胞變圓脫落后,加入1ml含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
      2,4min 1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞,根據(jù)細胞數(shù)量加入血清和DMSO,輕輕混勻,DMSO終濃度為10%,細胞密度不低于1x10E6/ml,每支凍存管凍存1ml細胞懸液,注意凍存管做好標識。
      3,將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

車前草(車前)    進口/國產(chǎn)    英文名稱    TLC法鑒別    含量:    121543-200501    規(guī)格:    20mg/支
決明子(小決明)    進口/國產(chǎn)    英文名稱    TLC法鑒別    含量:    121544-200501    規(guī)格:    20mg/支
綿萆薢    進口/國產(chǎn)    英文名稱    TLC法鑒別    含量:    121545-200501    規(guī)格:    20mg/支
黃根    進口/國產(chǎn)    英文名稱    TLC法鑒別    含量:    121546-200602    規(guī)格:    20mg/支
藤合歡(南蛇藤果)    進口/國產(chǎn)    英文名稱    TLC法鑒別    含量:    121547-200501    規(guī)格:    20mg/支
川射干    進口/國產(chǎn)    英文名稱    TLC法鑒別    含量:    121548-200501    規(guī)格:    20mg/支
合歡皮    進口/國產(chǎn)    英文名稱    TLC法鑒別    含量:    121549-200501    規(guī)格:    20mg/支
草果    進口/國產(chǎn)    英文名稱    TLC法鑒別    含量:    121550-200501    規(guī)格:    20mg/支
葛根(野葛)    進口/國產(chǎn)    英文名稱    TLC法鑒別    含量:    121551-200902    規(guī)格:    20mg/支
地錦草(斑地錦)    進口/國產(chǎn)    英文名稱    TLC法鑒別    含量:    121552-200501    規(guī)格:    20mg/支
黃精(制)    進口/國產(chǎn)    英文名稱    TLC法鑒別    含量:    121553-    規(guī)格:    20mg/支
苦杏仁(東北杏)    進口/國產(chǎn)    英文名稱    TLC法鑒別    含量:    121554-200702    規(guī)格:    20mg/支
茵陳(茵陳蒿)    進口/國產(chǎn)    英文名稱    TLC法鑒別    含量:    121555-    規(guī)格:    20mg/支
橘葉    進口/國產(chǎn)    英文名稱    TLC法鑒別    含量:    121556-200701    規(guī)格:    20mg/支
老鸛草    進口/國產(chǎn)    英文名稱    TLC法鑒別    含量:    121557-200801    規(guī)格:    20mg/支
陳皮炭    進口/國產(chǎn)    英文名稱    TLC法鑒別    含量:    121558-200801    規(guī)格:    20mg/支
粘委陵菜    進口/國產(chǎn)    英文名稱    TLC法鑒別    含量:    121559-200801    規(guī)格:    20mg/支
桃仁(山桃)    進口/國產(chǎn)    英文名稱    TLC法鑒別    含量:    121560-200601    規(guī)格:    20mg/支
香櫞(枸櫞)    進口/國產(chǎn)    英文名稱    TLC法鑒別    含量:    121561-200801    規(guī)格:    20mg/支
土壟大白蟻巢    進口/國產(chǎn)    英文名稱    TLC法鑒別    含量:    121563-    規(guī)格:    20mg/支
戰(zhàn)骨    進口/國產(chǎn)    英文名稱    TLC法鑒別    含量:    121564-200601    規(guī)格:    20mg/支
小鼠破骨細胞*培養(yǎng)基操作方法蟻(棕褐蟻)    進口/國產(chǎn)    英文名稱    TLC法鑒別    含量:    121565-200601    規(guī)格:    20mg/支
豨薟草(豨薟)    進口/國產(chǎn)    英文名稱    TLC法鑒別    含量:    121572-200601    規(guī)格:    20mg/支
五倍子(青麩楊)    進口/國產(chǎn)    英文名稱    TLC法鑒別    含量:    121573-200701    規(guī)格:    20mg/支
蕓香草    進口/國產(chǎn)    英文名稱    TCL法鑒別    含量:    121574-201001    規(guī)格:    20mg/支

 

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