Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞；NCI-H1975-Cas9-595品牌培養(yǎng)溫馨提示：
1）公司努力實(shí)現(xiàn)為科學(xué)研究提供實(shí)驗(yàn)細(xì)胞技術(shù)服務(wù)。所提供的實(shí)驗(yàn)細(xì)胞及其子代，不能用于人體實(shí)驗(yàn)和臨床診斷、治療。
2）公司細(xì)胞資源中心承諾盡大努力對(duì)實(shí)驗(yàn)細(xì)胞資源相關(guān)信息進(jìn)行及時(shí)更新。但限于我們的技術(shù)條件，中心不保證其準(zhǔn)確性。
3）從文獻(xiàn)等處引用的信息本中心未進(jìn)行核實(shí)，僅供參考。
4）使用者在接收、處理、保存、丟棄、轉(zhuǎn)讓及使用細(xì)胞的時(shí)候要遵守國(guó)內(nèi)外有關(guān)的法律法規(guī)，充分考慮可能存在的風(fēng)險(xiǎn)和責(zé)任，采取適當(dāng)?shù)陌踩吞幚泶胧┍M量降低對(duì)健康或環(huán)境的危害。

細(xì)胞名稱  Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞；NCI-H1975-Cas9-595品牌
形態(tài)特性   上皮樣
生長(zhǎng)特性  貼壁生長(zhǎng)
特征特性   該細(xì)胞是采用慢病毒感染的方式使NCI-H1975細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)Cas9-Flag-Neo，經(jīng)400ug/mlG418篩選得到的單克隆，經(jīng)Western Blotting驗(yàn)證該克隆可以表達(dá)Cas9蛋白，可直接用Crispr技術(shù)編輯基因組DNA。
培養(yǎng)條件   RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS；400ug/ml G418
傳代方法  1:3~1:6傳代；每周換液2~3次。　
傳代情況  C3
凍存條件   基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè)  培養(yǎng)法（-）　
STR   Amelogenin：x,x；CSF1PO：12,12；D12S391：17,17；D13S317：10,13；D16S539：9,12；D18S51：13,13；D19S433：15,15.2；D21S11：28,28；D2S1338：17,17；D3S1358：14,15；D5S818：11,12；D6S1043：12,12；D7S820：8,8；D8S1179：13,13；FGA：21,24；Penta E：12,12；TH01：7,7；TPOX：8,11；vWA：18,18；
同工酶

染色體

使用權(quán)限 A類
Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞；NCI-H1975-Cas9-595品牌細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量*，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
KIR2DL4 Others Human 人 KIR2DL4 / CD158D CHO細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)

CL-0106HFL1(人肺成纖維細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

人表皮黑色素細(xì)胞-淺色素裂解物HELM-l L

新生牛眼晶體上皮細(xì)胞;NBLE 人甲狀腺癌細(xì)胞，SW579細(xì)胞 RIN-m5F細(xì)胞，小鼠β胰島素瘤細(xì)胞

人膀胱上皮永生化細(xì)胞;SV-HUC-1

EPHA4 Others Human 人 EPHA4 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)
人臍帶血單個(gè)核細(xì)胞 Human

T-110A透明質(zhì)酸酶(含10mL酶解緩沖液)1mL

心肌細(xì)胞 (HCMa) (1×106 )

小鼠骨髓瘤細(xì)胞;Fox-NY 小鼠肺大靜脈平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL

正常大鼠腎細(xì)胞;NRK

SLAMF8 Others Mouse 小鼠 SLAMF8 / BLAME 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)
小鼠肉瘤瘤株;S180

人膠質(zhì)細(xì)胞(少突細(xì)胞)(HO) (1×106 )

原代表皮角化細(xì)胞特制無血清添加劑Many types of cells包裝：1ml

人巨細(xì)胞白血病細(xì)胞株;Mo7e 大鼠卵巢上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL

H22 小鼠肝癌細(xì)胞

ERBB2 Others Rat 大鼠 ErbB2 / HER2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)
D/E中和瓊脂250g用于衛(wèi)生環(huán)境中微生物的分離培養(yǎng)

水稻赤霉菌培養(yǎng)基 250g 用于水稻中赤霉菌培養(yǎng)

改良V-P培養(yǎng)基 V-P Medium,Modified 250 用于蠟樣芽孢桿菌的V-P試驗(yàn)(SN標(biāo)準(zhǔn))

標(biāo)準(zhǔn)Ⅱ號(hào)營(yíng)養(yǎng)瓊脂250g/瓶用于培養(yǎng)非苛氧的細(xì)菌，也用于奶制品中細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定incubationmedia標(biāo)準(zhǔn)Ⅱ號(hào)營(yíng)養(yǎng)瓊脂250g/瓶用于培養(yǎng)非苛氧的細(xì)菌，也用于奶制品中細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定

伊紅美藍(lán)瓊脂平板(9cm) 10個(gè)/包 弱選擇性培養(yǎng)基、用于分離腸道致病菌，特別是大腸桿菌
MZACAgar

25L incubation media 25L

抗生鏈霉菌 產(chǎn)磷酸二脂酸 支/瓶

VTMBroth

ColumbiaBloodAgarMedium
Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞；NCI-H1975-Cas9-595品牌伊紅美藍(lán)瓊脂(EMB)22060250g用于分離革蘭氏陰性腸道菌特別是大腸菌群和糞大腸菌群

葡萄糖胰蛋白胨肉湯 (CM0073) Oxoid incubation media 葡萄糖胰蛋白胨肉湯 (CM0073) Oxoid

諾爾斯氏鏈霉菌 模式菌株 支/瓶

ModifiedMacConkeyBroth

大豆-干酪素消化物培養(yǎng)基 250g 用于*的MPN測(cè)定，增菌培養(yǎng)，氯濃度可根據(jù)需要而調(diào)整

Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞；NCI-H1975-Cas9-595品牌質(zhì)量保證:
我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測(cè)，進(jìn)口來源，保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。