Nutlin-3(MDM2 拮抗劑 )1mg操作步驟詳細(xì)說(shuō)明書：

Nutlin-3(MDM2 拮抗劑 )1mg操作步驟產(chǎn)品及特點(diǎn)：
SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)是目前電泳法變性分離蛋白質(zhì)的主要方法，但是單獨(dú)配制各種溶液十分繁瑣，為此天澤基因開發(fā)了本產(chǎn)品。它具有下列特點(diǎn):
1. 一站式，即開即用，用戶不需單獨(dú)準(zhǔn)備各種成分，十分方便。
2. 安全，將實(shí)驗(yàn)人員接觸粉末狀丙烯酰胺的可能降到低。
3. 靈活，分開提供的丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺便于配制各種比例和濃度的 SDS-PAGE，滿足分離各種大小不同的蛋白質(zhì)的要求。
4. 使用改良的濃縮膠緩沖液，由于其含有染料，制備的濃縮膠呈藍(lán)色，便于上樣時(shí)識(shí)別加樣孔。
5. 電泳后可直接用于考染、銀染、Western 雜交等實(shí)驗(yàn)。
Nutlin-3(MDM2 拮抗劑 )1mg操作步驟對(duì)于組織樣品：
1. 把*切成細(xì)小的碎片。
2. 融解 RIPA 裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入 PMSF， 使 PMSF 的終濃度為 1mM。
3. 按照每 20 毫克組織加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不 充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解 液的用量。)
4. 用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。
5. 充分裂解后，10000-14000g 離心 3-5 分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的 PAGE、 Western 和免疫沉淀等操作。
6. 如果組織樣品本身非常細(xì)小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解，通過(guò)強(qiáng)烈 vortex 使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是 比較方便，不必使用勻漿器，缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
Nutlin-3(MDM2 拮抗劑 )1mg操作步驟對(duì)于培養(yǎng)細(xì)胞樣品：
1. 融解 RIPA 裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入 PMSF， 使 PMSF 的終濃度為 1mM。
2. 裂解細(xì)胞 2.1 對(duì)于貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用 PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血 清中的蛋白沒(méi)有干擾，可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 150-250 微升裂解液的比 例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸細(xì)胞 1-2 秒后，細(xì)胞就會(huì)被裂解。 2.2 對(duì)于懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，用手指把細(xì)胞用力彈散。按照 6 孔板每孔細(xì)胞 加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分 裂解后應(yīng)沒(méi)有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多，必需分裝成 50-100 萬(wàn)細(xì)胞/管， 然后再裂解。
3. 充分裂解后，10000-14000g 離心 3-5 分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的 PAGE、 Western 和免疫沉淀等操作。 注意：通常 6 孔板每孔細(xì)胞加入 150 微升裂解液已經(jīng)足夠，但如果細(xì)胞密度非常高 可以適當(dāng)加大裂解液的用量到 200 微升或 250 微升。
鈹試劑II25克RT

(四甲基聯(lián)本胺)

鍶shēng huà shì jì容量：25克

4-氧基本醋;隊(duì)氧基本醋 4-Mqthoxyphqnylccqtic ccid;HoMocnisic ccid;p-Mqthoxy-α-toluic ccid 104-01-8

亮綠乳糖培養(yǎng)基shēng huà shì jì容量：1米
四正丁基化100克

556-27-4蒜酸Alliin

3-chloro-4-fluoro-1-benzothiopxene-2-carboxylic acid 588676-90-8

氫化奎寧 Hydroquinine,98% 522-66-7 1G 表面活性劑

二本基酰安 N,N-DIPHqNYLFORMcMIDq 607-00-1
Amyloglucosidasefromaspergillusniger糖化*5克生物技術(shù)級(jí)，6000u/mg

11119-67-8Dowex 508 離子交換樹脂DOWEX(R) 50 8

Phosphoramidondiwo7iumsalt嶙米酮5毫克超純，90%

2,4,6-三基三嗪 2,4,6-Tris(2-pyridyl)-s-tri 3682-35-7 1G 通用試劑

檸檬酸鉀 Potassium citrate tribasic monohydrate... 6100-5-6 1
小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞(MA)(5×105)

人牙齦成纖維細(xì)胞總RNAHGF tRNA

敘利亞倉(cāng)鼠腎細(xì)胞;BHK-21

小鼠肺腺癌低轉(zhuǎn)移細(xì)胞(綠色熒光蛋白標(biāo)記);LA1-GFP 小鼠視網(wǎng)膜muller細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL

hDPSCs, 人前磨牙牙髓干細(xì)胞 Human

CPA1 Others Human 人 Carboxypeptidase-A1 / CPA1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
人牙齦成纖維細(xì)胞總RNAHGF tRNA

小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞(MA)(5×105)

敘利亞倉(cāng)鼠腎細(xì)胞;BHK-21

小鼠肺腺癌低轉(zhuǎn)移細(xì)胞(綠色熒光蛋白標(biāo)記);LA1-GFP 小鼠視網(wǎng)膜muller細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL

hDPSCs, 人前磨牙牙髓干細(xì)胞 Human

CPA1 Others Human 人 Carboxypeptidase-A1 / CPA1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
Nutlin-3(MDM2 拮抗劑 )1mg操作步驟ICAM1 Others Mouse 小鼠 ICAM-1 / CD54 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

小鼠漿細(xì)胞瘤;MPC-11

EPHB3 Others Human 人 EphB3 / HEK2 (aa 585-998) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

CSC, 小鼠心肌細(xì)胞 人小腸頸部表皮樣癌細(xì)胞，Ca Ski細(xì)胞 F81(貓腎細(xì)胞)

人導(dǎo)管瘤細(xì)胞;UACC812

Hela, 人細(xì)胞系