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Nicotinamide(Sirt1 抑制劑 )10g操作步驟

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更新時間:2017-07-20 10:13:29瀏覽次數(shù):205次

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Nicotinamide(Sirt1 抑制劑 )10g操作步驟如果組織樣品本身非常細小,可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈 vortex 使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續(xù)實驗。直接裂解的優(yōu)點是 比較方便,不必使用勻漿器,缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。

Nicotinamide(Sirt1 抑制劑 )10g操作步驟產(chǎn)品及特點:
SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)是目前電泳法變性分離蛋白質(zhì)的主要方法,但是單獨配制各種溶液十分繁瑣,為此天澤基因開發(fā)了本產(chǎn)品。它具有下列特點:
1.
一站式,即開即用,用戶不需單獨準(zhǔn)備各種成分,十分方便。
2. 安全,將實驗人員接觸粉末狀丙烯酰胺的可能降到低。
3. 靈活,分開提供的丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺便于配制各種比例和濃度的 SDS-PAGE,滿足分離各種大小不同的蛋白質(zhì)的要求。
4. 使用改良的濃縮膠緩沖液,由于其含有染料,制備的濃縮膠呈藍色,便于上樣時識別加樣孔。
5. 電泳后可直接用于考染、銀染、Western 雜交等實驗。
Nicotinamide(Sirt1 抑制劑 )10g操作步驟對于組織樣品:
1. 把*切成細小的碎片。
2. 融解 RIPA 裂解液,混勻。取適當(dāng)量的裂解液,在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入 PMSF 使 PMSF 的終濃度為 1mM。
3. 按照每 20 毫克組織加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不 充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當(dāng)減少裂解 液的用量。)
4.
用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。
5. 充分裂解后,10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進行后續(xù)的 PAGE、 Western 和免疫沉淀等操作。
6. 如果組織樣品本身非常細小,可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈 vortex 使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續(xù)實驗。直接裂解的優(yōu)點是 比較方便,不必使用勻漿器,缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
Nicotinamide(Sirt1 抑制劑 )10g操作步驟對于培養(yǎng)細胞樣品:
1. 融解 RIPA 裂解液,混勻。取適當(dāng)量的裂解液,在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入 PMSF 使 PMSF 的終濃度為 1mM。
2. 裂解細胞 2.1 對于貼壁細胞:去除培養(yǎng)液,用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血 清中的蛋白沒有干擾,可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 150-250 微升裂解液的比 例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞 1-2 秒后,細胞就會被裂解。 2.2 對于懸浮細胞:離心收集細胞,用手指把細胞用力彈散。按照 6 孔板每孔細胞 加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分 裂解后應(yīng)沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多,必需分裝成 50-100 萬細胞/管, 然后再裂解。
3. 充分裂解后,10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進行后續(xù)的 PAGE Western 和免疫沉淀等操作。 注意:通常 6 孔板每孔細胞加入 150 微升裂解液已經(jīng)足夠,但如果細胞密度非常高 可以適當(dāng)加大裂解液的用量到 200 微升或 250 微升。
蜂蠟500毫克

(胸腺嘧啶核苷)

錄化孔雀綠*培養(yǎng)基shēng huà shì jì容量:28100毫升

4--2-務(wù)同;基異丁基同;異丁基基同;異炳基炳同;2-異己同;2--4-務(wù)同 4-Mqthyl-2-pqntcnonq;Mqthyl isobutyl kqtonq;Isobutyl Mqthyl kqtonq;Isopropylccqtonq;2-Isohqxonq;4-Kqto-2-Mqthyl pqntcnq;MIKB 108-10-1

嶙酸鋰shēng huà shì jì容量:10
四唑紫,英文名或英文縮寫:TV,級別:超純,99%,規(guī)格:100毫克

二基硅氧烷和二本基硅氧烷的嵌段共聚物 VINYL TqRMINcTqD DIPHqNYLSILOXcNq, DIMqTHYLSILOXcNq COPOLYMqR 68921-96-

3,4-Dixy7noxy-thiopxene-2,5-dicarboxylic acid dimetxyl ester 58416-04-9

3,4- 3',4'-Dimethylacetophenone,98% 3637-1-2 5G 通用試劑

三硅酸
AMV反轉(zhuǎn)錄酶100

1068-90-2乙?;阴?/span>Dietxyl acetaMidoMalonate

1-Heptanol葡萄花醇25CP,99%

1- 1-Naphthonitrile,98% 86-53-3 5G 通用試劑

2-硫代*酸 2-Thiobarbituric acid (98%, TBA) 504-17-6 25G 通用試劑
CSF2 Others Rat 大鼠 GM-CSF / CSF2 人細胞裂解液 (陽性對照)

人雪旺細胞裂解物HSCL

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Nicotinamide(Sirt1 抑制劑 )10g操作步驟大鼠腹部脊髓神經(jīng)元(RVSCI)(1×106) HNE2, 人鼻咽癌細胞系 Human

SV40轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎細胞;COS-1

ERBB3 Others Mouse 小鼠 HER3 / ErbB3 人細胞裂解液 (陽性對照)

SW 982 [SW-982, SW982]人滑膜肉瘤細胞 SW 982 [SW-982, SW982] human synovial sarcoma cells L-15(GIBCO)+10%FBS

血管內(nèi)皮生長因子

Hep G2 人肝癌

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