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雪旺細(xì)胞生長因子5mL操作步驟

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更新時(shí)間:2017-07-20 09:03:29瀏覽次數(shù):148次

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雪旺細(xì)胞生長因子5mL操作步驟如果組織樣品本身非常細(xì)小,可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解,通過強(qiáng)烈 vortex 使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是 比較方便,不必使用勻漿器,缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。

雪旺細(xì)胞生長因子5mL操作步驟對于培養(yǎng)細(xì)胞樣品:
1. 融解 RIPA 裂解液,混勻。取適當(dāng)量的裂解液,在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入 PMSF 使 PMSF 的終濃度為 1mM。
2. 裂解細(xì)胞 2.1 對于貼壁細(xì)胞:去除培養(yǎng)液,用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血 清中的蛋白沒有干擾,可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 150-250 微升裂解液的比 例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸細(xì)胞 1-2 秒后,細(xì)胞就會被裂解。 2.2 對于懸浮細(xì)胞:離心收集細(xì)胞,用手指把細(xì)胞用力彈散。按照 6 孔板每孔細(xì)胞 加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分 裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多,必需分裝成 50-100 萬細(xì)胞/管, 然后再裂解。
3. 充分裂解后,10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進(jìn)行后續(xù)的 PAGE、 Western 和免疫沉淀等操作。 注意:通常 6 孔板每孔細(xì)胞加入 150 微升裂解液已經(jīng)足夠,但如果細(xì)胞密度非常高 可以適當(dāng)加大裂解液的用量到 200 微升或 250 微升。
雪旺細(xì)胞生長因子5mL操作步驟產(chǎn)品及特點(diǎn):
SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)是目前電泳法變性分離蛋白質(zhì)的主要方法,但是單獨(dú)配制各種溶液十分繁瑣,為此天澤基因開發(fā)了本產(chǎn)品。它具有下列特點(diǎn):
1.
一站式,即開即用,用戶不需單獨(dú)準(zhǔn)備各種成分,十分方便。
2. 安全,將實(shí)驗(yàn)人員接觸粉末狀丙烯酰胺的可能降到低。
3. 靈活,分開提供的丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺便于配制各種比例和濃度的 SDS-PAGE,滿足分離各種大小不同的蛋白質(zhì)的要求。
4. 使用改良的濃縮膠緩沖液,由于其含有染料,制備的濃縮膠呈藍(lán)色,便于上樣時(shí)識別加樣孔。
5. 電泳后可直接用于考染、銀染、Western 雜交等實(shí)驗(yàn)。
雪旺細(xì)胞生長因子5mL操作步驟詳細(xì)說明書:

雪旺細(xì)胞生長因子5mL操作步驟對于組織樣品:
1. 把*切成細(xì)小的碎片。
2. 融解 RIPA 裂解液,混勻。取適當(dāng)量的裂解液,在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入 PMSF, 使 PMSF 的終濃度為 1mM。
3. 按照每 20 毫克組織加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不 充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當(dāng)減少裂解 液的用量。)
4.
用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。
5. 充分裂解后,10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進(jìn)行后續(xù)的 PAGE、 Western 和免疫沉淀等操作。
6. 如果組織樣品本身非常細(xì)小,可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解,通過強(qiáng)烈 vortex 使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是 比較方便,不必使用勻漿器,缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
4.5ml凍存管5

(聚吡咯烷酮K90)

熒光素shēng huà shì jì容量:100

5-安基煙醋 5-cminonicotinic ccid 44-19-1

胰酪胨大豆瓊脂shēng huà shì jì容量:28100毫升
碳酸氫1

610-97-92-本甲酯metxyl 2-iodobenzoate

*()128℃,避光

2-茴香硫醚 2-Chlorothioanisole,96% 17733-22-1 5G 通用試劑

香葉木速 DiosMqtin 20-34-3
AGAROSERA常規(guī)分析用瓊脂糖生物技術(shù)級100GRT

3681-71-8乙酸順式-3-己烯酯 98%Leaf acetate

metxyl 3-amino-4-(metxylsulfonyl)thiopxene-2-carboxylate 175201-73-7

鄰苯二二癸酯 Didecyl phthalate,90.0% 84-77-5 25G 通用試劑

卡爾費(fèi)休-COULOMAT CG-K CATHOLYTE FORCOULOMETRIC K Nc
21. 臍帶細(xì)胞系統(tǒng)

人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞;SH-SY5Y

CM-H104真皮成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

小鼠胚胎成纖維細(xì)胞;PA317 小鼠小腸平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL

RN-c, 大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元 Rattus

F11R Others Mouse 小鼠 F11R / JAM-A / JAM-1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞;SH-SY5Y

21. 臍帶細(xì)胞系統(tǒng)

CM-H104真皮成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

小鼠胚胎成纖維細(xì)胞;PA317 小鼠小腸平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL

RN-c, 大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元 Rattus

F11R Others Mouse 小鼠 F11R / JAM-A / JAM-1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
雪旺細(xì)胞生長因子5mL操作步驟人胚肝二倍體細(xì)胞;CCC-HEL-1 人支氣管上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL

人肺支氣管癌細(xì)胞;NCI-H1650

RSV-G Others Respiratory syncytial virus/RSV 人類呼吸道合胞病毒 hRSV (A, rsb1734) glycoprotein G / RSV-G 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

Calu-6人退行性癌細(xì)胞 Calu-6 human degenerative cancer cells MEM培養(yǎng)基(GIBCO)+10%FBS

HGF Protein Human 重組人 HGF / Hepatocyte Growth Factor 蛋白

MDA-MB-435 人癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞

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