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非變性法蛋白沉淀試劑盒10 次操作步驟

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更新時間:2017-07-19 15:01:11瀏覽次數(shù):125次

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非變性法蛋白沉淀試劑盒10 次操作步驟如果組織樣品本身非常細小,可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈 vortex 使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續(xù)實驗。直接裂解的優(yōu)點是 比較方便,不必使用勻漿器,缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。

非變性法蛋白沉淀試劑盒10 次操作步驟產(chǎn)品及特點:
SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)是目前電泳法變性分離蛋白質(zhì)的主要方法,但是單獨配制各種溶液十分繁瑣,為此天澤基因開發(fā)了本產(chǎn)品。它具有下列特點:
1.
一站式,即開即用,用戶不需單獨準(zhǔn)備各種成分,十分方便。
2. 安全,將實驗人員接觸粉末狀丙烯酰胺的可能降到低。
3. 靈活,分開提供的丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺便于配制各種比例和濃度的 SDS-PAGE,滿足分離各種大小不同的蛋白質(zhì)的要求。
4. 使用改良的濃縮膠緩沖液,由于其含有染料,制備的濃縮膠呈藍色,便于上樣時識別加樣孔。
5. 電泳后可直接用于考染、銀染、Western 雜交等實驗。
非變性法蛋白沉淀試劑盒10 次操作步驟詳細說明書:

非變性法蛋白沉淀試劑盒10 次操作步驟對于組織樣品:
1. 把*切成細小的碎片。
2. 融解 RIPA 裂解液,混勻。取適當(dāng)量的裂解液,在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入 PMSF, 使 PMSF 的終濃度為 1mM
3. 按照每 20 毫克組織加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不 充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當(dāng)減少裂解 液的用量。)
4.
用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。
5. 充分裂解后,10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進行后續(xù)的 PAGE、 Western 和免疫沉淀等操作。
6. 如果組織樣品本身非常細小,可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈 vortex 使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續(xù)實驗。直接裂解的優(yōu)點是 比較方便,不必使用勻漿器,缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
非變性法蛋白沉淀試劑盒10 次操作步驟對于培養(yǎng)細胞樣品:
1. 融解 RIPA 裂解液,混勻。取適當(dāng)量的裂解液,在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入 PMSF 使 PMSF 的終濃度為 1mM。
2. 裂解細胞 2.1 對于貼壁細胞:去除培養(yǎng)液,用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血 清中的蛋白沒有干擾,可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 150-250 微升裂解液的比 例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞 1-2 秒后,細胞就會被裂解。 2.2 對于懸浮細胞:離心收集細胞,用手指把細胞用力彈散。按照 6 孔板每孔細胞 加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分 裂解后應(yīng)沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多,必需分裝成 50-100 萬細胞/管, 然后再裂解。
3. 充分裂解后,10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進行后續(xù)的 PAGE、 Western 和免疫沉淀等操作。 注意:通常 6 孔板每孔細胞加入 150 微升裂解液已經(jīng)足夠,但如果細胞密度非常高 可以適當(dāng)加大裂解液的用量到 200 微升或 250 微升。
D-色醇25RT

pxenol 250ml 國產(chǎn)

油酸丁酯,英文名或英文縮寫:Butyl oleate,級別:AR98%,規(guī)格:500

硬脂醋鋇;十八醋鋇 BcriuM stqcrctq 6862-32-6

枸櫞酸,英文名或英文縮寫: citrate tetradecahydrate,級別:CP,規(guī)格:100
吐溫401028

80-40-0對磺酸乙酯etxyl p-tolue sulfonate

COOMASSIEBRILLIANTBLUEG-250考馬斯亮蘭G-250蛋白組學(xué)級25G6104-58-1RT

2--6-甲基 2-Cyano-6-methylpyridine,97% 1620-75-3 1G 通用試劑

(牛肝)/化酵素/CAT/Catalase(bovine liver) BR,2000-5000u/mg 1 國產(chǎn)/進口
Acetylenetetrabromide對稱四溴乙烷5CP99%

22202-68-2lpha-酮戊二酸鈉(2-8)ALPHA-KETOGLUTARIC ACID MONOwo7ium SALT

O-Acetyl-L-serinexy7nochlorideO-乙酰-L-氫錄化絲酸100BR,98%

N-乙基 1-(2-Aminoethyl)piper,99.0% 140-31-8 100MG 通用試劑

瓊脂糖凝膠 Sepharo... Sepharose CL-6B 62610-50-8 25
CCL17 Others Human CCL17 / TARC / SCYA17 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)

人臍動脈內(nèi)皮細胞HUAEC

非洲綠猴腎細胞系/HCV-p7;Vero-HCV-p7

HBL-100細胞,整合SV40基因的上皮細胞 人結(jié)直腸腺癌細胞,HCT-15細胞 CM-R021大鼠胰腺上皮細胞*培養(yǎng)基100mL

大鼠胸大動脈平滑肌細胞;A7r5

FLT4 Others Human VEGFR3 / FLT4 人細胞裂解液 (陽性對照)
人臍動脈內(nèi)皮細胞HUAEC

CCL17 Others Human CCL17 / TARC / SCYA17 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)

非洲綠猴腎細胞系/HCV-p7;Vero-HCV-p7

HBL-100細胞,整合SV40基因的上皮細胞 人結(jié)直腸腺癌細胞,HCT-15細胞 CM-R021大鼠胰腺上皮細胞*培養(yǎng)基100mL

大鼠胸大動脈平滑肌細胞;A7r5

FLT4 Others Human VEGFR3 / FLT4 人細胞裂解液 (陽性對照)
非變性法蛋白沉淀試劑盒10 次操作步驟HK-2(人腎小管上皮細胞) 5×106cells/瓶×2 MN-c, 小鼠皮質(zhì)神經(jīng)元 人胚肺成纖維細胞;WI-38 [WI38]

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞;KMY0911

PTH Others Human PTH / PTH1 / Parathyroid Hormone 人細胞裂解液 (陽性對照)

SP20細胞,人骨肉瘤細胞 圓弧青霉 人肺成纖維細胞;HFL1

SW 982(人滑膜肉瘤細胞) 5×106cells/瓶×2

SD大鼠神經(jīng)干細胞 Neural stem cells in SD rat

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