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*抑制劑溶液,1 mg/mL1mL操作步驟

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更新時間:2017-07-19 14:46:13瀏覽次數:197次

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*抑制劑溶液,1 mg/mL1mL操作步驟如果組織樣品本身非常細小,可以適當剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈 vortex 使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續(xù)實驗。直接裂解的優(yōu)點是 比較方便,不必使用勻漿器,缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。

*抑制劑溶液,1 mg/mL1mL操作步驟產品及特點:
SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)是目前電泳法變性分離蛋白質的主要方法,但是單獨配制各種溶液十分繁瑣,為此天澤基因開發(fā)了本產品。它具有下列特點:
1.
一站式,即開即用,用戶不需單獨準備各種成分,十分方便。
2. 安全,將實驗人員接觸粉末狀丙烯酰胺的可能降到低。
3. 靈活,分開提供的丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺便于配制各種比例和濃度的 SDS-PAGE,滿足分離各種大小不同的蛋白質的要求。
4. 使用改良的濃縮膠緩沖液,由于其含有染料,制備的濃縮膠呈藍色,便于上樣時識別加樣孔。
5. 電泳后可直接用于考染、銀染、Western 雜交等實驗。
*抑制劑溶液,1 mg/mL1mL操作步驟對于組織樣品:
1. 把*切成細小的碎片。
2. 融解 RIPA 裂解液,混勻。取適當量的裂解液,在使用前數分鐘內加入 PMSF, 使 PMSF 的終濃度為 1mM。
3. 按照每 20 毫克組織加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不 充分可以適當添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當減少裂解 液的用量。)
4.
用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。
5. 充分裂解后,10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進行后續(xù)的 PAGE Western 和免疫沉淀等操作。
6. 如果組織樣品本身非常細小,可以適當剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈 vortex 使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續(xù)實驗。直接裂解的優(yōu)點是 比較方便,不必使用勻漿器,缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
*抑制劑溶液,1 mg/mL1mL操作步驟對于培養(yǎng)細胞樣品:
1. 融解 RIPA 裂解液,混勻。取適當量的裂解液,在使用前數分鐘內加入 PMSF, 使 PMSF 的終濃度為 1mM
2. 裂解細胞 2.1 對于貼壁細胞:去除培養(yǎng)液,用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血 清中的蛋白沒有干擾,可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 150-250 微升裂解液的比 例加入裂解液。用槍吹打數下,使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞 1-2 秒后,細胞就會被裂解。 2.2 對于懸浮細胞:離心收集細胞,用手指把細胞用力彈散。按照 6 孔板每孔細胞 加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分 裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多,必需分裝成 50-100 萬細胞/管, 然后再裂解。
3. 充分裂解后,10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進行后續(xù)的 PAGE、 Western 和免疫沉淀等操作。 注意:通常 6 孔板每孔細胞加入 150 微升裂解液已經足夠,但如果細胞密度非常高 可以適當加大裂解液的用量到 200 微升或 250 微升。
GENEPAGE4%*CLDPAK*4% GENE-PAGE 19:1,7 M 尿素生物技術級500MLCOLD

(*1:10000)

十五酸,英文名或英文縮寫:Pentadecanoic acid,級別:生物技術級,98%,規(guī)格:1

己二醋二異忻酯 Bis(2-qthylhqxyl) cdipctq 103-3-1

嶙酸二鈉,英文名或英文縮寫:wo7ium phosphate dibasic dodecahydrate,級別:AR,99%,規(guī)格:25
脫氧核糖核酸緩沖液25

3395-3-71,2-二甲氧基-4-二硝基本 96%1,2-DImetxOXY-4,5-BENZENE

L-2-基丁酸10gRT

(III) 五水合物 Bismuth nitrate pentahydrate, 98.0% 10035-06-0 100G 通用試劑

Potassium Phosphate Monobasic ( 98%) 100G 通用試劑
A.C.E.BUFFER10X,TINTEDA.C.E. 測序緩沖液 (10X 帶顏色)測序級50MLRT

102-71-6三乙醇胺Triethanolamine

GAMMAIRRADIATEDPENICILLING,wo7iumSALT*G (無菌)組織培養(yǎng)級20ML69-57-8RT

三聚乙醛 Paraldehyde,97.0% 123-63-7 500ML 通用試劑

卡拉膠/角叉膠/鹿角菜膠/角叉菜膠/愛爾蘭苔菜膠/角義膠/角義菜膠/愛爾蘭苔浸膏/Carrageenan BR,強度1200
SCN2B Others Human SCN2B 人細胞裂解液 (陽性對照)

人胚胎皮膚成纖維細胞;HES

C57BL/6小鼠胚胎干細胞 C57BL/6 mouse embryonic stem cells

RPMI-8226細胞,人多發(fā)性骨髓瘤細胞 單核細胞增生李斯特氏菌 SV40T轉化人臍靜脈內皮細胞;PUMC-HUVEC-T1

TT(人甲狀腺導管癌細胞) 5×106cells/瓶×2

HSC-T6(大鼠肝星形細胞) 5×106cells/瓶×2 hDPSCs, 人前磨牙牙髓干細胞 人原胚腎轉化細胞;293 Ad5
人胚胎皮膚成纖維細胞;HES

SCN2B Others Human SCN2B 人細胞裂解液 (陽性對照)

C57BL/6小鼠胚胎干細胞 C57BL/6 mouse embryonic stem cells

RPMI-8226細胞,人多發(fā)性骨髓瘤細胞 單核細胞增生李斯特氏菌 SV40T轉化人臍靜脈內皮細胞;PUMC-HUVEC-T1

TT(人甲狀腺導管癌細胞) 5×106cells/瓶×2

HSC-T6(大鼠肝星形細胞) 5×106cells/瓶×2 hDPSCs, 人前磨牙牙髓干細胞 人原胚腎轉化細胞;293 Ad5
*抑制劑溶液,1 mg/mL1mL操作步驟SERPINI1 Others Human SERPINI1 人細胞裂解液 (陽性對照)

大鼠嗜堿性粒細胞性白血病細胞;RBL-1

IL3 Others Rat 大鼠 IL3 / interleukin 3 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)

A549, 人肺癌細胞系 T細胞白血病細胞,HPB-ALL細胞 RKO(結腸腺癌細胞)

小鼠淋巴瘤細胞(NK靶細胞);YAC-1

T-101A*(10mL 酶解緩沖液)1mL

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