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更新時間:2017-07-19 14:42:35瀏覽次數(shù):181次
聯(lián)系我時,請告知來自 儀表網(wǎng)*抑制劑溶液,20mg/mL1mL操作步驟對于培養(yǎng)細胞樣品:
1. 融解 RIPA 裂解液,混勻。取適當量的裂解液,在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入 PMSF, 使 PMSF 的終濃度為 1mM。
2. 裂解細胞 2.1 對于貼壁細胞:去除培養(yǎng)液,用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血 清中的蛋白沒有干擾,可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 150-250 微升裂解液的比 例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞 1-2 秒后,細胞就會被裂解。 2.2 對于懸浮細胞:離心收集細胞,用手指把細胞用力彈散。按照 6 孔板每孔細胞 加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分 裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多,必需分裝成 50-100 萬細胞/管, 然后再裂解。
3. 充分裂解后,10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進行后續(xù)的 PAGE、 Western 和免疫沉淀等操作。 注意:通常 6 孔板每孔細胞加入 150 微升裂解液已經(jīng)足夠,但如果細胞密度非常高 可以適當加大裂解液的用量到 200 微升或 250 微升。
*抑制劑溶液,20mg/mL1mL操作步驟產(chǎn)品及特點:
SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)是目前電泳法變性分離蛋白質的主要方法,但是單獨配制各種溶液十分繁瑣,為此天澤基因開發(fā)了本產(chǎn)品。它具有下列特點:
1. 一站式,即開即用,用戶不需單獨準備各種成分,十分方便。
2. 安全,將實驗人員接觸粉末狀丙烯酰胺的可能降到低。
3. 靈活,分開提供的丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺便于配制各種比例和濃度的 SDS-PAGE,滿足分離各種大小不同的蛋白質的要求。
4. 使用改良的濃縮膠緩沖液,由于其含有染料,制備的濃縮膠呈藍色,便于上樣時識別加樣孔。
5. 電泳后可直接用于考染、銀染、Western 雜交等實驗。
*抑制劑溶液,20mg/mL1mL操作步驟詳細說明書:
*抑制劑溶液,20mg/mL1mL操作步驟對于組織樣品:
1. 把*切成細小的碎片。
2. 融解 RIPA 裂解液,混勻。取適當量的裂解液,在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入 PMSF, 使 PMSF 的終濃度為 1mM。
3. 按照每 20 毫克組織加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不 充分可以適當添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當減少裂解 液的用量。)
4. 用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。
5. 充分裂解后,10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進行后續(xù)的 PAGE、 Western 和免疫沉淀等操作。
6. 如果組織樣品本身非常細小,可以適當剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈 vortex 使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續(xù)實驗。直接裂解的優(yōu)點是 比較方便,不必使用勻漿器,缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
GENTLEREVIEWSTRIPPINGBUFFER溫和剝離緩沖液1LCOLD
(聚乙二醇8000)
N-水楊酰本,英文名或英文縮寫:Salicylanilide,級別:高純,98%,規(guī)格:500毫克
聚二流二炳烷磺醋內(nèi) Bis-(wo7ium sulfopropyl)-disulfidq 706-32-2
無水錄化鈣,英文名或英文縮寫:Calcium chloride anxy7nous,級別:CP,98%,規(guī)格:1克
唾液酸,英文名或英文縮寫:NAN,級別:BR,98%,規(guī)格:100毫克
10016-20-3γ-環(huán)糊精98%Cyclohexapentylose
PCRDNAMARKERWITHLOADINGDYEPCR Marker, 含上樣緩沖液生物技術級藍色液體FROZENsigma
N-乙基 1-Ethylpiper,≥98.0 % 5308-25-8 25G 通用試劑
十四烷基鈉 Sodium 1-tetradecanesulfonate (99%) 6994-45-2 1G 通用試劑
96孔細胞培養(yǎng)板5毫克
(聚吡咯烷酮K30)
油酸鋁shēng huà shì jì容量:1公斤
5-氮胞苷(+4℃) 5-czccytidinq 30-67-
乙二安四乙酸二鈉銅鹽shēng huà shì jì容量:2~8℃250毫克
IL1RN Others Rat 大鼠 IL-1RA / IL1RN 人細胞裂解液 (陽性對照)
人胚腎細胞;2V6.11
人膀胱上皮細胞*培養(yǎng)基 100mL
H22細胞,小鼠肝癌細胞 Neuro-2A(腦神經(jīng)瘤細胞) EB病毒轉化的人B淋巴細胞;KMY0909
CXCL1 Protein Human 重組人 CXCL1 / MGSA / NAP-3 蛋白 (His & SUMO 標簽)
SK-BR-3(人癌細胞) 5×106cells/瓶×2 狗 CD2 人細胞裂解液 (陽性對照)
人胚腎細胞;2V6.11
IL1RN Others Rat 大鼠 IL-1RA / IL1RN 人細胞裂解液 (陽性對照)
人膀胱上皮細胞*培養(yǎng)基 100mL
H22細胞,小鼠肝癌細胞 Neuro-2A(腦神經(jīng)瘤細胞) EB病毒轉化的人B淋巴細胞;KMY0909
CXCL1 Protein Human 重組人 CXCL1 / MGSA / NAP-3 蛋白 (His & SUMO 標簽)
SK-BR-3(人癌細胞) 5×106cells/瓶×2 狗 CD2 人細胞裂解液 (陽性對照)
*抑制劑溶液,20mg/mL1mL操作步驟CNTN2 Others Human 人 CNTN2 / Contactin-2 人細胞裂解液 (陽性對照)
大鼠骨骼肌成肌細胞;L6
CD274 Others Cynomolgus 食蟹猴 PD-L1 / B7-H1 / CD274 人細胞裂解液 (陽性對照)
HB細胞,人口腔癌細胞 人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞,HUVEC(原代)細胞 大鼠嗜堿性粒細胞性白血病細胞;RBL-1
C127(小鼠癌細胞) 5×106cells/瓶×2
T-111A木瓜蛋白酶(含10mL酶解緩沖液)1mL
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