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上海莼試生物技術(shù)有限公司
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親和層析柱3 mL操作步驟

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更新時間:2017-07-18 16:26:51瀏覽次數(shù):144次

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親和層析柱3 mL操作步驟如果組織樣品本身非常細小,可以適當剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈 vortex 使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續(xù)實驗。直接裂解的優(yōu)點是 比較方便,不必使用勻漿器,缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。

親和層析柱3 mL操作步驟產(chǎn)品及特點:
SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)是目前電泳法變性分離蛋白質(zhì)的主要方法,但是單獨配制各種溶液十分繁瑣,為此天澤基因開發(fā)了本產(chǎn)品。它具有下列特點:
1.
一站式,即開即用,用戶不需單獨準備各種成分,十分方便。
2. 安全,將實驗人員接觸粉末狀丙烯酰胺的可能降到低。
3. 靈活,分開提供的丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺便于配制各種比例和濃度的 SDS-PAGE,滿足分離各種大小不同的蛋白質(zhì)的要求。
4. 使用改良的濃縮膠緩沖液,由于其含有染料,制備的濃縮膠呈藍色,便于上樣時識別加樣孔。
5. 電泳后可直接用于考染、銀染、Western 雜交等實驗。
親和層析柱3 mL操作步驟詳細說明書:

親和層析柱3 mL操作步驟對于組織樣品:
1. 把*切成細小的碎片。
2. 融解 RIPA 裂解液,混勻。取適當量的裂解液,在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入 PMSF 使 PMSF 的終濃度為 1mM。
3. 按照每 20 毫克組織加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不 充分可以適當添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當減少裂解 液的用量。)
4.
用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。
5. 充分裂解后,10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進行后續(xù)的 PAGE、 Western 和免疫沉淀等操作。
6. 如果組織樣品本身非常細小,可以適當剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈 vortex 使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續(xù)實驗。直接裂解的優(yōu)點是 比較方便,不必使用勻漿器,缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
親和層析柱3 mL操作步驟對于培養(yǎng)細胞樣品:
1. 融解 RIPA 裂解液,混勻。取適當量的裂解液,在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入 PMSF, 使 PMSF 的終濃度為 1mM
2. 裂解細胞 2.1 對于貼壁細胞:去除培養(yǎng)液,用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血 清中的蛋白沒有干擾,可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 150-250 微升裂解液的比 例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞 1-2 秒后,細胞就會被裂解。 2.2 對于懸浮細胞:離心收集細胞,用手指把細胞用力彈散。按照 6 孔板每孔細胞 加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分 裂解后應(yīng)沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多,必需分裝成 50-100 萬細胞/管, 然后再裂解。
3. 充分裂解后,10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進行后續(xù)的 PAGE Western 和免疫沉淀等操作。 注意:通常 6 孔板每孔細胞加入 150 微升裂解液已經(jīng)足夠,但如果細胞密度非常高 可以適當加大裂解液的用量到 200 微升或 250 微升。
PROTEINMWMARKERPRECISE蛋白 Marker超純級200 lFrozen

(還原型輔酶II四鈉>98%)

環(huán)己六醇,英文名或英文縮寫:Inositol,級別:BR90%,規(guī)格:5毫克

BOTTLq BUFFqRqD PqPTONq WcTR 500G

1,5-二嶙酸-D-核酮糖,英文名或英文縮寫:RuDP,級別:BR,98%,規(guī)格:5
維生素B61KU28

621-84-1基芐酯Benzyl carbamate

3,5-二扶/3,5-二扶嘧啶,英文名或英文縮寫:3,5-Difluoropyridine,級別:CP,規(guī)格:500

四甘醇 Tetraglycol 31692-85-0 100G 通用試劑

氧化鑭 LcnthcnuM oxidq;LcnthcnuM trioxidq;LcnthcnuM sqsquioxidq 131-81-8
5--6-3-吲哚-β-D-半乳糖苷shēng huà shì jì容量:1公斤

4457-32-3-4-硝基芐酯4-nitnobenzyl xlonofonmate

RPR(梅毒)shēng huà shì jì容量:25/

6--2- 6-Bromo-2-naphthol,97% 15231-91-1 5G 通用試劑

尿*測試盒 哈里森氏法 50/48 國產(chǎn)
CD47 Others Rat 大鼠 CD47 人細胞裂解液 (陽性對照)

人腦微血管內(nèi)皮細胞裂解物HBMECL

人角膜上皮細胞*培養(yǎng)基 100mL

HPT-8細胞,小鼠飼養(yǎng)層上皮細胞 293(轉(zhuǎn)染腺病毒E1A基因的人腎上皮細胞) 長白山豬胚胎皮膚成纖維樣細胞;201184

EFNB2 Protein Human 重組人 Ephrin-B2 / EFNB2 蛋白 (His & Fc 標簽)

EA.hy926(人臍靜脈細胞融合細胞) 5×106cells/瓶×2 大隱靜脈平滑肌細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
人腦微血管內(nèi)皮細胞裂解物HBMECL

CD47 Others Rat 大鼠 CD47 人細胞裂解液 (陽性對照)

人角膜上皮細胞*培養(yǎng)基 100mL

HPT-8細胞,小鼠飼養(yǎng)層上皮細胞 293(轉(zhuǎn)染腺病毒E1A基因的人腎上皮細胞) 長白山豬胚胎皮膚成纖維樣細胞;201184

EFNB2 Protein Human 重組人 Ephrin-B2 / EFNB2 蛋白 (His & Fc 標簽)

EA.hy926(人臍靜脈細胞融合細胞) 5×106cells/瓶×2 大隱靜脈平滑肌細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
親和層析柱3 mL操作步驟CD19 Others Human CD19 / Leu-12 人細胞裂解液 (陽性對照)

大鼠垂體瘤細胞;GH3

人脈絡(luò)絲成纖維細胞 (HCPF)( 5×105 )

人黑色素瘤細胞;A875 大鼠腸上皮細胞*培養(yǎng)基 100mL

DH82 狗腎惡性組織細胞增生癥細胞

腸平滑肌細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)

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