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dCTP 溶液,2.5mM2mL運輸

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更新時間:2017-07-17 13:14:56瀏覽次數(shù):88次

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dCTP 溶液,2.5mM2mL運輸是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機率引入隨機引入突變。

dCTP 溶液,2.5mM2mL運輸產(chǎn)品及特點:
易錯 PCRerror-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機率引入隨機引入突變。如果有適當?shù)倪x擇方法,則可從構(gòu)建的突變庫選出所需突變體。易錯 PCR 和常規(guī) PCR 的比較如下:本產(chǎn)品就是專門為廣大的研究工作者進行易錯 PCR 而開發(fā),本產(chǎn)品具有下列特點:
1. 即開即用,十分簡單方便,尤其在生物制藥和酶學研究領(lǐng)域顯示出了它的*性。
2. 配方經(jīng)過精心優(yōu)化,突變率穩(wěn)定,突變沒有趨向性。易錯 PCR 的突變率為 0.66% ±0.13%),詳見使用手冊疑難解答。
3. 比體內(nèi)基因突變更快捷簡單,但如果在 PCR 引物中設(shè)計位點,則可使產(chǎn)物克隆到表達載體,也可以用于體內(nèi)蛋白活性的篩選。
4. 可用于連續(xù)易錯 PCRsequential error-prone PCR),只需把上一次易錯 PCR 的產(chǎn)物用作下一次易錯 PCR 的模板即可,使每一次獲得的小突變累積而產(chǎn)生重要的有益突變。
5. 只適用于擴增 1kb 以下的產(chǎn)物,對于 1kb 以上的產(chǎn)物,建議分段擴增。
dCTP 溶液,2.5mM2mL運輸變性溫度與時間:
模板變性溫度是決定 PCR 反應(yīng)中雙鏈 DNA 解鏈的溫度,達不到變 性溫度就不會產(chǎn)生單鏈 DNA 模板,PCR 也就不會啟動。變性溫度低則變性不*, DNA 雙鏈會很快復性,因而減少產(chǎn)量。變性溫度太高,又會影響酶的活性。一般情況 下可設(shè)為 94 20~30 秒,高溫時間應(yīng)盡量縮短,以保持耐熱 DNA 聚合酶的活力, 高變性溫度不宜超過 95 退火溫度與時間:退火溫度決定 PCR 特異性與產(chǎn)量。溫度高特異性強,但過高則引物 不能與模板牢固結(jié)合.
dCTP 溶液,2.5mM2mL運輸DNA 擴增效率下降;
溫度低產(chǎn)量高,但過低可造成引物與模板 錯配,非特異性產(chǎn)物增加。合適的退火溫度一般在 45~68之間。設(shè)置特定反應(yīng)的 適退火溫度,可根據(jù)引物的(G+C%含量進行推測,一般實驗中退火溫度比擴增引 物的熔解溫度 Tm 5,退火時間一般為 30~60 秒,足以使引物與模板之間*結(jié) 合,長時間退火沒有必要。
dCTP 溶液,2.5mM2mL運輸使用方法:
1. 30 uL 的標準 PCR 反應(yīng)體系為例,如果反應(yīng)體系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的 PCR 管中,加入下列成分:易錯 PCR Mix, 10× 3 uL 易錯 PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自備 DNA 模板(10ng/uL 1 uL PCR 引物(自備,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL 1 -5 U 補水到 30 uL
2.
按已經(jīng)優(yōu)化的 PCR 條件進行一定循環(huán)數(shù)的 PCR(循環(huán)數(shù)與突變率的關(guān)系見下表),然后取 5 uL 電泳檢查。如果沒有優(yōu)化的 PCR 條件,一般可以先嘗試下面的 PCR 條件: PCR 前變性 94 3 分鐘易錯 PCR 94 1 分鐘 45 1 分鐘 循環(huán) 30 次(見注) 72 1 分鐘注:易錯 PCR 一般不需要熱啟動,也不需要在 PCR 結(jié)束后做延伸處理。
Shikonin 10 mg     5,8-dihydroxy-2-[1R-1-hydroxy-4-methyl-3-penten-1-yl]-1,4-nepxtxelenedione; C。I 75535|Isoarnepin 4|NSC 252844; Shikonin

Clorgyline hydrochloride 100 mg     N-2,4-Dichlorophenoxypropyl-N-methylpropargylamine N-[3-2,4-dichlorophenoxypropyl]-N-methyl-2-propyn-1-amine, monohydrochloride

氫氧化鈉(1KG     Sodium Hydroxide 1310-73-2; MW 41

L-+-Ergothioneine 50 mg     αS-carboxy-23-dihydro-N,N,N-trimethyl-2-thioxo-inner salt-1H-imidazole-4-ethanaminium 2-Mercaotohistidine betaine|NSC 7175; L-+-Ergothioneine

Sulpho NONOate 25 mg     disodium E-1-sulfonatodiazen-1-ium-1,2-diolate; Sulpho NONOate

4-Aminobenzoic hydrazide; MPO Inhibitor 4-ABH     Myeloperoxidase Inhibitor
PtdIns-5-P1 1,2-dipalmitoyl ammonium salt 1 mg     1-12-dihexadecanoylphosphatidylinositol-5-phosphate, diammonium salt; DPPI-5-P1; PtdIns-5-P1 1,2-dipalmitoyl ammonium salt

Streptavidin:Eu-W1024 1 mg     Streptavidin:Eu-W1024

DAPT 10 mg     N-[2S-3,5-difluorophenylacetyl]-L-alanyl-2-phenyl-11-dimethylethyl ester-glycine; GSI-IX; DAPT

Silodosin 25 mg     KMD-3213; 2,3-dihydro-1-3-hydroxypropyl-5-[2R-2-[[2-[2-2,2,2-trifluoroethoxyphenoxy]ethyl]amino]propyl]-1H-indole-7-carboxamide

JWH 081 4-hydroxynaphthyl metabolite 10 mg     4-hydroxy-1-naphthalenyl)(1-pentyl-1H-indol-3-yl-methanone; JWH 081 4-hydroxynaphthyl metabolite

DiaEasy Dialyzer (3 ml) MWCO 3.5 kDa     DiaEasy Dialyzer (3 ml) MWCO 3.5 kDa
Arachidonic Acid-d8 1 mg     5Z,8Z,11Z,14Z-eicosatetraenoic-5,68,911,12,14,15-d8 acid AA-d8; Arachidonic Acid-d8

PX 2 1 mg     FU-PX; R-N-1-ami-oxo-3-pxenylpropan-2-yl-1-5-fluoropentyl-1H-indazole-3-carboxamide

鬼筆環(huán)肽-iFluor 633偶聯(lián)物     Phalloidin-iFluor 633 Conjugate

Eicosapentaenoyl Ethanolamide-d4 500 ug     N-2-xy7noxyetxyl-1,1’,2,2-d4-5Z,8Z,11Z14Z,17Z-eicosapentaenamide EPEA-d4; Eicosapentaenoyl Ethanolamide-d4

Olvanil 50 mg     N-[4-xy7noxy-3-metxoxypxenylmetxyl]-9Z-octadecenamide; N-Vanillyloleamide|NE 1955Olvanil

Streptomycin sesquisulfate; Streptomucn A     Streptomycin Sulfate
PrestonBrothBase

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PALCAM添加劑 PALCAM Supplement 1mg/*10 添加到HB4188中,用于李氏菌的選擇性分離培養(yǎng)

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CepulodinIrgasanNovobiocinAgar

MIO培養(yǎng)基 MIO Medium 用于動力、吲哚和*試驗(FDA方法)

5號膽鹽 Bile salt No. 5 25 BR,70%

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A-1Medium
dCTP 溶液,2.5mM2mL運輸LeadAcetateMedium

BacillusMegatheriumMedium

副溶血性弧菌瓊脂 250 用于副溶血性弧菌的選擇性分離培養(yǎng)

緩沖蛋白胨水(BPW)250g/瓶用于沙門氏菌、阪崎腸桿菌前增菌,也可用于其它細菌的培養(yǎng)incubationmedia緩沖蛋白胨水(BPW)250g/瓶用于沙門氏菌、阪崎腸桿菌前增菌,也可用于其它細菌的培養(yǎng)

XyloseLysineDesoxycholateMedium

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