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更新時間:2017-07-17 13:14:56瀏覽次數(shù):88次
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dCTP 溶液,2.5mM2mL運輸產(chǎn)品及特點:
易錯 PCR(error-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機率引入隨機引入突變。如果有適當?shù)倪x擇方法,則可從構(gòu)建的突變庫選出所需突變體。易錯 PCR 和常規(guī) PCR 的比較如下:本產(chǎn)品就是專門為廣大的研究工作者進行易錯 PCR 而開發(fā),本產(chǎn)品具有下列特點:
1. 即開即用,十分簡單方便,尤其在生物制藥和酶學研究領(lǐng)域顯示出了它的*性。
2. 配方經(jīng)過精心優(yōu)化,突變率穩(wěn)定,突變沒有趨向性。易錯 PCR 的突變率為 0.66% (±0.13%),詳見使用手冊疑難解答。
3. 比體內(nèi)基因突變更快捷簡單,但如果在 PCR 引物中設(shè)計位點,則可使產(chǎn)物克隆到表達載體,也可以用于體內(nèi)蛋白活性的篩選。
4. 可用于連續(xù)易錯 PCR(sequential error-prone PCR),只需把上一次易錯 PCR 的產(chǎn)物用作下一次易錯 PCR 的模板即可,使每一次獲得的小突變累積而產(chǎn)生重要的有益突變。
5. 只適用于擴增 1kb 以下的產(chǎn)物,對于 1kb 以上的產(chǎn)物,建議分段擴增。
dCTP 溶液,2.5mM2mL運輸變性溫度與時間:
模板變性溫度是決定 PCR 反應(yīng)中雙鏈 DNA 解鏈的溫度,達不到變 性溫度就不會產(chǎn)生單鏈 DNA 模板,PCR 也就不會啟動。變性溫度低則變性不*, DNA 雙鏈會很快復性,因而減少產(chǎn)量。變性溫度太高,又會影響酶的活性。一般情況 下可設(shè)為 94℃ 20~30 秒,高溫時間應(yīng)盡量縮短,以保持耐熱 DNA 聚合酶的活力, 高變性溫度不宜超過 95℃。 退火溫度與時間:退火溫度決定 PCR 特異性與產(chǎn)量。溫度高特異性強,但過高則引物 不能與模板牢固結(jié)合.
dCTP 溶液,2.5mM2mL運輸DNA 擴增效率下降;
溫度低產(chǎn)量高,但過低可造成引物與模板 錯配,非特異性產(chǎn)物增加。合適的退火溫度一般在 45~68℃之間。設(shè)置特定反應(yīng)的 適退火溫度,可根據(jù)引物的(G+C)%含量進行推測,一般實驗中退火溫度比擴增引 物的熔解溫度 Tm 低 5℃,退火時間一般為 30~60 秒,足以使引物與模板之間*結(jié) 合,長時間退火沒有必要。
dCTP 溶液,2.5mM2mL運輸使用方法:
1. 以 30 uL 的標準 PCR 反應(yīng)體系為例,如果反應(yīng)體系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的 PCR 管中,加入下列成分:易錯 PCR Mix, 10× 3 uL 易錯 PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自備 DNA 模板(10ng/uL) 1 uL PCR 引物(自備,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL) 1 -5 U 補水到 30 uL
2. 按已經(jīng)優(yōu)化的 PCR 條件進行一定循環(huán)數(shù)的 PCR(循環(huán)數(shù)與突變率的關(guān)系見下表),然后取 5 uL 電泳檢查。如果沒有優(yōu)化的 PCR 條件,一般可以先嘗試下面的 PCR 條件: PCR 前變性 94℃ 3 分鐘易錯 PCR 94℃ 1 分鐘 45℃ 1 分鐘 循環(huán) 30 次(見注) 72℃ 1 分鐘注:易錯 PCR 一般不需要熱啟動,也不需要在 PCR 結(jié)束后做延伸處理。
Shikonin (10 mg) 5,8-dihydroxy-2-[(1R)-1-hydroxy-4-methyl-3-penten-1-yl]-1,4-nepxtxelenedione; C。I。 75535|Isoarnepin 4|NSC 252844; Shikonin
Clorgyline (hydrochloride) (100 mg) N-2,4-Dichlorophenoxypropyl-N-methylpropargylamine; N-[3-(2,4-dichlorophenoxy)propyl]-N-methyl-2-propyn-1-amine, monohydrochloride
氫氧化鈉(1KG) Sodium Hydroxide, 1310-73-2; MW 41
L-(+)-Ergothioneine (50 mg) αS-carboxy-2,3-dihydro-N,N,N-trimethyl-2-thioxo-inner salt-1H-imidazole-4-ethanaminium; 2-Mercaotohistidine betaine|NSC 7175; L-(+)-Ergothioneine
Sulpho NONOate (25 mg) disodium (E)-1-sulfonatodiazen-1-ium-1,2-diolate; Sulpho NONOate
4-Aminobenzoic hydrazide; MPO Inhibitor; 4-ABH Myeloperoxidase Inhibitor
PtdIns-(5)-P1 (1,2-dipalmitoyl) (ammonium salt) (1 mg) 1-(1,2-dihexadecanoylphosphatidyl)inositol-5-phosphate, diammonium salt; DPPI-5-P1; PtdIns-(5)-P1 (1,2-dipalmitoyl) (ammonium salt)
Streptavidin:Eu-W1024 (1 mg) Streptavidin:Eu-W1024
DAPT (10 mg) N-[2S-(3,5-difluorophenyl)acetyl]-L-alanyl-2-phenyl-1,1-dimethylethyl ester-glycine; GSI-IX; DAPT
Silodosin (25 mg) KMD-3213; 2,3-dihydro-1-(3-hydroxypropyl)-5-[(2R)-2-[[2-[2-(2,2,2-trifluoroethoxy)phenoxy]ethyl]amino]propyl]-1H-indole-7-carboxamide
JWH 081 4-hydroxynaphthyl metabolite (10 mg) (4-hydroxy-1-naphthalenyl)(1-pentyl-1H-indol-3-yl)-methanone; JWH 081 4-hydroxynaphthyl metabolite
DiaEasy Dialyzer (3 ml) MWCO 3.5 kDa DiaEasy Dialyzer (3 ml) MWCO 3.5 kDa
Arachidonic Acid-d8 (1 mg) 5Z,8Z,11Z,14Z-eicosatetraenoic-5,6,8,9,11,12,14,15-d8 acid; AA-d8; Arachidonic Acid-d8
PX 2 (1 mg) FU-PX; (R)-N-(1-ami-oxo-3-pxenylpropan-2-yl)-1-(5-fluoropentyl)-1H-indazole-3-carboxamide
鬼筆環(huán)肽-iFluor 633偶聯(lián)物 Phalloidin-iFluor 633 Conjugate
Eicosapentaenoyl Ethanolamide-d4 (500 ug) N-(2-xy7noxyetxyl-1,1’,2,2’-d4)-5Z,8Z,11Z,14Z,17Z-eicosapentaenamide; EPEA-d4; Eicosapentaenoyl Ethanolamide-d4
Olvanil (50 mg) N-[(4-xy7noxy-3-metxoxypxenyl)metxyl]-9Z-octadecenamide; N-Vanillyloleamide|NE 1955Olvanil
Streptomycin sesquisulfate; Streptomucn A Streptomycin Sulfate
PrestonBrothBase
沙門氏菌顯色培養(yǎng)基 Salmonella Chromogenic Medium 用于沙門氏菌的顯色培養(yǎng),沙門氏菌顯紫色
PALCAM添加劑 PALCAM Supplement 1mg/支*10 添加到HB4188中,用于李氏菌的選擇性分離培養(yǎng)
ChapmanStone瓊脂培養(yǎng)基250g/瓶用于*的分離培養(yǎng)incubationmediaChapmanStone瓊脂培養(yǎng)基250g/瓶用于*的分離培養(yǎng)
雙料乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基管(含小倒管) 10ml*20
CepulodinIrgasanNovobiocinAgar
MIO培養(yǎng)基 MIO Medium 用于動力、吲哚和*試驗(FDA方法)
5號膽鹽 Bile salt No. 5 25克 BR,70%
碎肉葡萄糖肉湯基礎(chǔ)250g/瓶用于厭氧菌特別是專性厭氧菌的培養(yǎng)、增菌和修復,含維生素K,需添加(庖肉牛肉粒)incubationmedia碎肉葡萄糖肉湯基礎(chǔ)250g/瓶用于厭氧菌特別是專性厭氧菌的培養(yǎng)、增菌和修復,含維生素K,需添加(庖肉牛肉粒)
A-1Medium
dCTP 溶液,2.5mM2mL運輸LeadAcetateMedium
BacillusMegatheriumMedium
副溶血性弧菌瓊脂 250 用于副溶血性弧菌的選擇性分離培養(yǎng)
緩沖蛋白胨水(BPW)250g/瓶用于沙門氏菌、阪崎腸桿菌前增菌,也可用于其它細菌的培養(yǎng)incubationmedia緩沖蛋白胨水(BPW)250g/瓶用于沙門氏菌、阪崎腸桿菌前增菌,也可用于其它細菌的培養(yǎng)
XyloseLysineDesoxycholateMedium
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