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dTTP 溶液,2.5mM2mL運(yùn)輸

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dTTP 溶液,2.5mM2mL運(yùn)輸是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對(duì)功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機(jī)率引入隨機(jī)引入突變。

dTTP 溶液,2.5mM2mL運(yùn)輸使用方法:
1. 30 uL 的標(biāo)準(zhǔn) PCR 反應(yīng)體系為例,如果反應(yīng)體系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的 PCR 管中,加入下列成分:易錯(cuò) PCR Mix, 10× 3 uL 易錯(cuò) PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自備 DNA 模板(10ng/uL 1 uL PCR 引物(自備,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL 1 -5 U 補(bǔ)水到 30 uL
2.
按已經(jīng)優(yōu)化的 PCR 條件進(jìn)行一定循環(huán)數(shù)的 PCR(循環(huán)數(shù)與突變率的關(guān)系見下表),然后取 5 uL 電泳檢查。如果沒有優(yōu)化的 PCR 條件,一般可以先嘗試下面的 PCR 條件: PCR 前變性 94 3 分鐘易錯(cuò) PCR 94 1 分鐘 45 1 分鐘 循環(huán) 30 次(見注) 72 1 分鐘注:易錯(cuò) PCR 一般不需要熱啟動(dòng),也不需要在 PCR 結(jié)束后做延伸處理。
dTTP 溶液,2.5mM2mL運(yùn)輸產(chǎn)品及特點(diǎn):
易錯(cuò) PCRerror-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對(duì)功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機(jī)率引入隨機(jī)引入突變。如果有適當(dāng)?shù)倪x擇方法,則可從構(gòu)建的突變庫(kù)選出所需突變體。易錯(cuò) PCR 和常規(guī) PCR 的比較如下:本產(chǎn)品就是專門為廣大的研究工作者進(jìn)行易錯(cuò) PCR 而開發(fā),本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):
1. 即開即用,十分簡(jiǎn)單方便,尤其在生物制藥和酶學(xué)研究領(lǐng)域顯示出了它的*性。
2. 配方經(jīng)過精心優(yōu)化,突變率穩(wěn)定,突變沒有趨向性。易錯(cuò) PCR 的突變率為 0.66% ±0.13%),詳見使用手冊(cè)疑難解答。
3. 比體內(nèi)基因突變更快捷簡(jiǎn)單,但如果在 PCR 引物中設(shè)計(jì)位點(diǎn),則可使產(chǎn)物克隆到表達(dá)載體,也可以用于體內(nèi)蛋白活性的篩選。
4. 可用于連續(xù)易錯(cuò) PCRsequential error-prone PCR),只需把上一次易錯(cuò) PCR 的產(chǎn)物用作下一次易錯(cuò) PCR 的模板即可,使每一次獲得的小突變累積而產(chǎn)生重要的有益突變。
5. 只適用于擴(kuò)增 1kb 以下的產(chǎn)物,對(duì)于 1kb 以上的產(chǎn)物,建議分段擴(kuò)增。
dTTP 溶液,2.5mM2mL運(yùn)輸DNA 擴(kuò)增效率下降;
溫度低產(chǎn)量高,但過低可造成引物與模板 錯(cuò)配,非特異性產(chǎn)物增加。合適的退火溫度一般在 45~68之間。設(shè)置特定反應(yīng)的 適退火溫度,可根據(jù)引物的(G+C%含量進(jìn)行推測(cè),一般實(shí)驗(yàn)中退火溫度比擴(kuò)增引 物的熔解溫度 Tm 5,退火時(shí)間一般為 30~60 秒,足以使引物與模板之間*結(jié) 合,長(zhǎng)時(shí)間退火沒有必要。
dTTP 溶液,2.5mM2mL運(yùn)輸詳細(xì)說(shuō)明書:

16,16-dimethyl Prostaglandin E2 1 mg     9-oxo-11。alpha。,15R-dihydroxy-16,16-dimethyl-prosta-5Z13E-dien-1-oic acid; 1616-dimethyl PGE2; 16,16-dimethyl Prostaglandin E2

CID-755673 10 mg     2,3,4,5-tetrahydro-7-hydroxy-1H-benzofuro[2,3-c]azepin-1-one

*(25GM     Sodium Bienponete , Endotoxin and cell culture tested.

Manoalide 1 mg     5R-4-[2R,6R-36-dihydro-6-hydroxy-5-[3E-4-methyl-6-2,6,6-trimethyl-1-cyclohexen-1-yl-3-hexen-1-yl]-2H-pyran-2-yl]-5-hydroxy-25H-furanone; Manoalide

SE 175 5 mg     2-[[4-[nitnooxymethyl]benzoyl]thio]-benzoic acid methyl ester; SE 175

MeOSuc - Ala - Ala - Pro - Val AFC MeOSuc-AAPV-AFC     Elastase Substrate, Fluorogenic
PtdIns-4,5-P2 1,2-dipalmitoyl ammonium salt 500 ug     1-1,2R-dihexadecanoylphosphatidylinositol-4,5-bisphosphate, triammonium salt Phosphatidylinositol-4,5-diphosphate C-16|DPPI-45-P2; PtdIns-4,5-P2 1,2-dipalmitoyl ammonium salt

Peptide YY 3-36 100 ug     Pancreatic Peptide YY|Peptide Tyrosine Tyrosine

NSC 23766 hydrochloride 1 mg     N6-[2-[[4-diethylamino-1-methylbutyl]amino]-6-methyl-4-pyrimidinyl]-2-methyl-4,6-diamine, trihydrochloride; NSC 23766 hydrochloride

TBCA 25 mg     Casein Kinase II Inhibitor III|Tetrabromocinnamic Acid; 2E-3-2,3,4,5-tetrabromophenyl-2-propenoic acid

RCS-4 4-hydroxyphenyl metabolite 1 mg     4-hydroxyphenyl)(1-pentyl-1H-indol-3-ylmethanone; RCS-4 4-hydroxyphenyl metabolite

DiaEasy Dialyzer (10 ml) MWCO 1 kDa     DiaEasy Dialyzer (10 ml) MWCO 1 kDa
13-OxoODE 25 ug     13-oxo-9Z11E-octadecadienoic acid; 13-KODE; 13-OxoODE

RHC-80267 50 mg     U-57908 1,1-[O,O-[1,6-hexanediylbisiminocarbonyl]dioxime]

鬼筆環(huán)肽-iFluor 514偶聯(lián)物     Phalloidin-iFluor 514 Conjugate

4-xy7noxyamphetamine xy7nochloride 50 mg     4-

Oleic Acid 500 mg     9Z-Octadecenoic acid; Oleic Acid

2E     ML243
煌綠乳糖膽鹽肉湯BGLB22220250g用于多管發(fā)酵法測(cè)定大腸菌群的確證試驗(yàn)(GB4789.3-2002)。

沙保氏葡萄糖瓊脂 (CM0041) Oxoid incubation media 沙保氏葡萄糖瓊脂 (CM0041) Oxoid

納地青霉 用于做清酒“木通口”的糖化菌 /

SD-39瓊脂250g用于濾膜法大腸桿菌0離培養(yǎng)(NEOGEN方法)

支原體半流培養(yǎng)基 250g 用于支原體的培養(yǎng)
緩沖蛋白胨水(BPW)250g用于沙門氏菌前增菌培養(yǎng),亦可用于李氏菌前增菌培養(yǎng)(GBSN標(biāo)準(zhǔn))

硅酸鹽細(xì)菌培養(yǎng)基(含瓊脂) 250g 用于硅酸鹽細(xì)菌的分離培養(yǎng)

醋酸鉛培養(yǎng)基 Lead Acetate Medium 250 用于硫化氫試驗(yàn)

酸性肉湯250g/瓶用于酸性罐頭食品無(wú)菌檢驗(yàn)incubationmedia酸性肉湯250g/瓶用于酸性罐頭食品無(wú)菌檢驗(yàn)

結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂平板(9cm) 10個(gè)/ 用于大腸菌群的固體平板檢測(cè)
dTTP 溶液,2.5mM2mL運(yùn)輸BrilliantGreenAgar

BacteroidesPhageRecoveryMediumBroth

快速硫化氫(H2S)試驗(yàn)瓊脂 250 用于彎曲桿菌的硫化氫試驗(yàn)(GB標(biāo)準(zhǔn))

*顯色培養(yǎng)基l/瓶用于*快速檢測(cè),24h內(nèi)出結(jié)果,*顯藍(lán)色incubationmedia*顯色培養(yǎng)基l/瓶用于*快速檢測(cè),24h內(nèi)出結(jié)果,*顯藍(lán)色

營(yíng)養(yǎng)瓊脂(即用型) 100ml/ 細(xì)菌計(jì)數(shù)、不含糖,可作血瓊脂基礎(chǔ)和傳代用

dTTP 溶液,2.5mM2mL運(yùn)輸變性溫度與時(shí)間:
模板變性溫度是決定 PCR 反應(yīng)中雙鏈 DNA 解鏈的溫度,達(dá)不到變 性溫度就不會(huì)產(chǎn)生單鏈 DNA 模板,PCR 也就不會(huì)啟動(dòng)。變性溫度低則變性不*, DNA 雙鏈會(huì)很快復(fù)性,因而減少產(chǎn)量。變性溫度太高,又會(huì)影響酶的活性。一般情況 下可設(shè)為 94 20~30 秒,高溫時(shí)間應(yīng)盡量縮短,以保持耐熱 DNA 聚合酶的活力, 高變性溫度不宜超過 95。 退火溫度與時(shí)間:退火溫度決定 PCR 特異性與產(chǎn)量。溫度高特異性強(qiáng),但過高則引物 不能與模板牢固結(jié)合

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