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更新時間:2017-07-17 13:06:12瀏覽次數(shù):180次
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dNTP 溶液,2.5mM0.5mL圖片使用方法:
1. 以 30 uL 的標準 PCR 反應體系為例,如果反應體系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的 PCR 管中,加入下列成分:易錯 PCR Mix, 10× 3 uL 易錯 PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自備 DNA 模板(10ng/uL) 1 uL PCR 引物(自備,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL) 1 -5 U 補水到 30 uL
2. 按已經(jīng)優(yōu)化的 PCR 條件進行一定循環(huán)數(shù)的 PCR(循環(huán)數(shù)與突變率的關系見下表),然后取 5 uL 電泳檢查。如果沒有優(yōu)化的 PCR 條件,一般可以先嘗試下面的 PCR 條件: PCR 前變性 94℃ 3 分鐘易錯 PCR 94℃ 1 分鐘 45℃ 1 分鐘 循環(huán) 30 次(見注) 72℃ 1 分鐘注:易錯 PCR 一般不需要熱啟動,也不需要在 PCR 結(jié)束后做延伸處理。
dNTP 溶液,2.5mM0.5mL圖片產(chǎn)品及特點:
易錯 PCR(error-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機率引入隨機引入突變。如果有適當?shù)倪x擇方法,則可從構(gòu)建的突變庫選出所需突變體。易錯 PCR 和常規(guī) PCR 的比較如下:本產(chǎn)品就是專門為廣大的研究工作者進行易錯 PCR 而開發(fā),本產(chǎn)品具有下列特點:
1. 即開即用,十分簡單方便,尤其在生物制藥和酶學研究領域顯示出了它的*性。
2. 配方經(jīng)過精心優(yōu)化,突變率穩(wěn)定,突變沒有趨向性。易錯 PCR 的突變率為 0.66% (±0.13%),詳見使用手冊疑難解答。
3. 比體內(nèi)基因突變更快捷簡單,但如果在 PCR 引物中設計位點,則可使產(chǎn)物克隆到表達載體,也可以用于體內(nèi)蛋白活性的篩選。
4. 可用于連續(xù)易錯 PCR(sequential error-prone PCR),只需把上一次易錯 PCR 的產(chǎn)物用作下一次易錯 PCR 的模板即可,使每一次獲得的小突變累積而產(chǎn)生重要的有益突變。
5. 只適用于擴增 1kb 以下的產(chǎn)物,對于 1kb 以上的產(chǎn)物,建議分段擴增。
dNTP 溶液,2.5mM0.5mL圖片DNA 擴增效率下降;
溫度低產(chǎn)量高,但過低可造成引物與模板 錯配,非特異性產(chǎn)物增加。合適的退火溫度一般在 45~68℃之間。設置特定反應的 適退火溫度,可根據(jù)引物的(G+C)%含量進行推測,一般實驗中退火溫度比擴增引 物的熔解溫度 Tm 低 5℃,退火時間一般為 30~60 秒,足以使引物與模板之間*結(jié) 合,長時間退火沒有必要。
dNTP 溶液,2.5mM0.5mL圖片詳細說明書:
15-keto Prostaglandin E2 (5 mg) 9,15-dioxo-11α-hydroxy-prosta-5Z,13E-dien-1-oic acid; 15-keto PGE2; 15-keto Prostaglandin E2
cis-tneme7ol (hydrochloride) (5 mg) CG 315|Contramal|NIH 10969|Tramal|Ultram|Zydol;
腐胺(25GM) Putrescine, Dihydrochloride, 333-93-7; MW 161.09
4(Z),7(Z)-Decadienoic Acid-d5 (50 ug) (4Z,7Z)-deca-4,7-dienoic-9,9’,10,10,10-d5 acid; 4(Z),7(Z)-Decadienoic Acid-d5
SNAP (100 mg) N-(acetyloxy)-3-nitnosothiovaline; S-nitnoso-N-Acetyl-D,L-Penicillamine; SNAP
2S,3R,11bS)-2-{[(1R)-6,7-Dimethoxy-1,2,3,4-tetrahydroisoinoneolin-1-yl]methyl}-3-ethyl-9,10-dimethoxy-2,3,4,6,7,11b-hexahydro-1H-pyrido[2,1-a]isoinoneoline Emetine dihydrochloride
PtdIns-(3)-P1 (1,2-dipalmitoyl) (ammonium salt) (100 ug) 1-(1,2-dihexadecanoylphosphatidyl)inositol-3-phosphate, diammonium salt; DPPI-3-P1; PtdIns-(3)-P1 (1,2-dipalmitoyl) (ammonium salt)
α-Bungarotoxin (1 mg) α-BTX|α-Bgt; α-bungarotoxin
CP 80633 (500 ug) 5-[3-[(1S,2S,4R)-bicyclo[2。2。1]hept-2-yloxy]-methoxyphenyl]tetrahydro-2-(1H)-pyrimidinone; CP 80633
Atractyloside (potewwium salt) (500 ug) (2β)-15α-hydroxy-2-[[2-O-(3-methyl-1-oxobutyl)-3,4-di-O-sulfo-β-D-glucopyranosyl]oxy]-19-norkaur-16-en-18-oic acid, dipotewwium salt
S3I-201 (25 mg) 2-hydroxy-4-[[2-[[(4-methylphenyl)sulfonyl]oxy]acetyl]amino]-benzoic acid; NSC 74859; S3I-201
DiaEasy Dialyzer (10 ml) MWCO 12-14 kDa DiaEasy Dialyzer (10 ml) MWCO 12-14 kDa
13(S)-HODE (100 ug) 13S-xy7noxy-9Z,11E-octadecadienoic acid; 13(S)-HODE
LB 42708 (10 mg) [1-[[1-[(4-bromopxenyl)metxyl]-1H-imidazol-5-yl]metxyl]-4-(1-naphthalenyl)-1H-pyrrol-3-yl]-4-morpholinyl-metxanone
DiD Perchlorate 超級純 DiD Perchlorate UltraPure Grade
Levetiracetam (50 mg) (αS)-etxyl-2-oxo-1-pyrrolidineacetamide; UCB-L 059|Kea ; Levetiracetam
Stearoyl Ethanolamide (5 mg) N-(2-xy7noxyetxyl)-octadec*; Ceramid|Stearic Acid Ethanolamide; Stearoyl Ethanolamide
5,7-Dixy7noxy-2-(4-xy7noxypxenyl)-4H-1-benzopyran-4-one; Chamomile; Flavone; NSC 83244; Versulin Apigenin
含225mL胰酪胨大豆多粘菌素肉湯均質(zhì)袋用于蠟樣芽孢桿菌的檢測
乳糖莫能霉素葡萄糖醛酸瓊脂 LMG Agar 用于濾膜MUG法檢測食品中大腸菌群數(shù)(SN/T1059.2)
血瓊脂基礎2號 Blood Agar Base N0.2 250 供分離營養(yǎng)要求非常高的致病菌用,后加血液制成血平板
馬鈴薯-葡萄糖-瓊脂培養(yǎng)基250g/瓶用于霉菌和酵母菌計數(shù)incubationmedia馬鈴薯-葡萄糖-瓊脂培養(yǎng)基250g/瓶用于霉菌和酵母菌計數(shù)
*麥康凱瓊脂基礎(SMAC) 250g 用于大腸桿菌O157的分離培
No.4AgarBase
改良GAM瓊脂 250g 用于脆弱抑桿菌的分離培養(yǎng)
多粘菌素B Polymyxin B 1.2mg/支*5 用1ml無菌水溶解后添加于100ml HB0256中
四硫磺酸鈉煌綠(TTB)增菌液基礎TTB250g/瓶用于沙門氏菌選擇性增菌,每培養(yǎng)基中添加03支203cubationmedia四硫磺酸鈉煌綠(TTB)增菌液基礎TTB250g/瓶用于沙門氏菌選擇性增菌,每培養(yǎng)基中添加03支20316
OxfordAgarBase
dNTP 溶液,2.5mM0.5mL圖片ISPMedium2
Baird-Parker 瓊脂基礎 1000(g) incubation media Baird-Parker 瓊脂基礎 1000(g)
*脫羧酶肉湯發(fā)酵管 *脫羧酶肉湯發(fā)酵管 20支 BR
真菌瓊脂培養(yǎng)基250用于無菌生長試驗incubationmedia真菌瓊脂培養(yǎng)基250用于無菌生長試驗
TTC(氮藍四唑) 10g 添加于TTC瓊脂基礎中
dNTP 溶液,2.5mM0.5mL圖片變性溫度與時間:
模板變性溫度是決定 PCR 反應中雙鏈 DNA 解鏈的溫度,達不到變 性溫度就不會產(chǎn)生單鏈 DNA 模板,PCR 也就不會啟動。變性溫度低則變性不*, DNA 雙鏈會很快復性,因而減少產(chǎn)量。變性溫度太高,又會影響酶的活性。一般情況 下可設為 94℃ 20~30 秒,高溫時間應盡量縮短,以保持耐熱 DNA 聚合酶的活力, 高變性溫度不宜超過 95℃。 退火溫度與時間:退火溫度決定 PCR 特異性與產(chǎn)量。溫度高特異性強,但過高則引物 不能與模板牢固結(jié)合
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