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dNTP 溶液 ,10mM0.5mL保存

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dNTP 溶液 ,10mM0.5mL保存是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對(duì)功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機(jī)率引入隨機(jī)引入突變。

dNTP 溶液 ,10mM0.5mL保存詳細(xì)說(shuō)明書(shū):

dNTP 溶液 ,10mM0.5mL保存產(chǎn)品及特點(diǎn):
易錯(cuò) PCRerror-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對(duì)功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機(jī)率引入隨機(jī)引入突變。如果有適當(dāng)?shù)倪x擇方法,則可從構(gòu)建的突變庫(kù)選出所需突變體。易錯(cuò) PCR 和常規(guī) PCR 的比較如下:本產(chǎn)品就是專(zhuān)門(mén)為廣大的研究工作者進(jìn)行易錯(cuò) PCR 而開(kāi)發(fā),本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):
1. 即開(kāi)即用,十分簡(jiǎn)單方便,尤其在生物制藥和酶學(xué)研究領(lǐng)域顯示出了它的*性。
2. 配方經(jīng)過(guò)精心優(yōu)化,突變率穩(wěn)定,突變沒(méi)有趨向性。易錯(cuò) PCR 的突變率為 0.66% ±0.13%),詳見(jiàn)使用手冊(cè)疑難解答。
3. 比體內(nèi)基因突變更快捷簡(jiǎn)單,但如果在 PCR 引物中設(shè)計(jì)位點(diǎn),則可使產(chǎn)物克隆到表達(dá)載體,也可以用于體內(nèi)蛋白活性的篩選。
4. 可用于連續(xù)易錯(cuò) PCRsequential error-prone PCR),只需把上一次易錯(cuò) PCR 的產(chǎn)物用作下一次易錯(cuò) PCR 的模板即可,使每一次獲得的小突變累積而產(chǎn)生重要的有益突變。
5. 只適用于擴(kuò)增 1kb 以下的產(chǎn)物,對(duì)于 1kb 以上的產(chǎn)物,建議分段擴(kuò)增。
dNTP 溶液 ,10mM0.5mL保存變性溫度與時(shí)間:
模板變性溫度是決定 PCR 反應(yīng)中雙鏈 DNA 解鏈的溫度,達(dá)不到變 性溫度就不會(huì)產(chǎn)生單鏈 DNA 模板,PCR 也就不會(huì)啟動(dòng)。變性溫度低則變性不*, DNA 雙鏈會(huì)很快復(fù)性,因而減少產(chǎn)量。變性溫度太高,又會(huì)影響酶的活性。一般情況 下可設(shè)為 94 20~30 秒,高溫時(shí)間應(yīng)盡量縮短,以保持耐熱 DNA 聚合酶的活力, 高變性溫度不宜超過(guò) 95。 退火溫度與時(shí)間:退火溫度決定 PCR 特異性與產(chǎn)量。溫度高特異性強(qiáng),但過(guò)高則引物 不能與模板牢固結(jié)合.
dNTP 溶液 ,10mM0.5mL保存DNA 擴(kuò)增效率下降;
溫度低產(chǎn)量高,但過(guò)低可造成引物與模板 錯(cuò)配,非特異性產(chǎn)物增加。合適的退火溫度一般在 45~68之間。設(shè)置特定反應(yīng)的 適退火溫度,可根據(jù)引物的(G+C%含量進(jìn)行推測(cè),一般實(shí)驗(yàn)中退火溫度比擴(kuò)增引 物的熔解溫度 Tm 5,退火時(shí)間一般為 30~60 秒,足以使引物與模板之間*結(jié) 合,長(zhǎng)時(shí)間退火沒(méi)有必要。
dNTP 溶液 ,10mM0.5mL保存使用方法:
1. 30 uL 的標(biāo)準(zhǔn) PCR 反應(yīng)體系為例,如果反應(yīng)體系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的 PCR 管中,加入下列成分:易錯(cuò) PCR Mix, 10× 3 uL 易錯(cuò) PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自備 DNA 模板(10ng/uL 1 uL PCR 引物(自備,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL 1 -5 U 補(bǔ)水到 30 uL
2.
按已經(jīng)優(yōu)化的 PCR 條件進(jìn)行一定循環(huán)數(shù)的 PCR(循環(huán)數(shù)與突變率的關(guān)系見(jiàn)下表),然后取 5 uL 電泳檢查。如果沒(méi)有優(yōu)化的 PCR 條件,一般可以先嘗試下面的 PCR 條件: PCR 前變性 94 3 分鐘易錯(cuò) PCR 94 1 分鐘 45 1 分鐘 循環(huán) 30 次(見(jiàn)注) 72 1 分鐘注:易錯(cuò) PCR 一般不需要熱啟動(dòng),也不需要在 PCR 結(jié)束后做延伸處理。
15-keto Prostaglandin E2 1 mg     9,15-dioxo-11α-hydroxy-prosta-5Z13E-dien-1-oic acid; 15-keto PGE2 15-keto Prostaglandin E2

Ritalinic Acid 50 mg     α-

腐胺(10GM     Putrescine, Dihydrochloride, 333-93-7; MW 161.08

4Z),7Z-Decadienoic Acid-d5 1 mg     4Z,7Z-deca-47-dienoic-9,9’,1010,10-d5 acid; 4Z),7Z-Decadienoic Acid-d5

S-nitnoso-L-glutathione 50 mg     N-N-L-。gamma。-glutamyl-S-nitnoso-L-cysteinyl-glycine; GSNO; S-nitnoso-L-glutathione

Methyl -5-((2-t-butylcarbamothioylhydrazonomethyl-1-2,4-difluorophenyl-1H-pyrazole-4-carboxylate     CID 2745687
PtdIns-34,5-P3 1,2-dipalmitoyl sodium salt 1 mg     1-1,2R-dihexadecanoylphosphatidylinositol-3,45-trisphosphate, tetrasodium salt; Phosphatidylinositol-3,45-triphosphate C-16|DPPI-3,4,5-P3 PtdIns-3,45-P3 12-dipalmitoyl sodium salt

TAK-632 5 mg     N-[5-[[7-cyano-2-[cyclopropylcarbonylamino]-6-benzothiazolyl]oxy]-2-fluorophenyl]-3-trifluoromethyl-benzeneacetamide

CP 80633 10 mg     5-[3-[1S,2S4R-bicyclo[2。2。1]hept-2-yloxy]-methoxyphenyl]tetrahydro-2-1H-pyrimidinone CP 80633

BAY-11-7085 50 mg     3-[[4-1,1-dimethylethylphenyl]sulfonyl]-2E-propenenitnile

Fast Green FCF 5 g     N-ethyl-N-[4-[[4-[ethyl[3-sulfophenylmethyl]amino]phenyl]4-hydroxy-2-sulfophenylmethylene]-2,5-cyclohexadien-1-ylidene]-3-sulfo-benzenemethanaminium disodium salt; NSC 379443; Fast Green FCF

DiaEasy Dialyzer (15 ml) MWCO 12-14 kDa     DiaEasy Dialyzer (15 ml) MWCO 12-14 kDa
13R-HODE cholesteryl ester 50 ug     13R-xy7noxy-9Z,11E-octadecadienoic acid cholesteryl ester; 13R-HODE cholesteryl ester

LAQ824 5 mg     Dacinostat|NVP-LAQ824 2E-N-xy7noxy-3-[4-[[2-xy7noxyetxyl[2-1H-indol-3-yletxyl]amino]metxyl]pxenyl]-2-propenamide

DiSBAC30111     DiSBAC30111

Levetiracetam 100 mg     (αS-etxyl-2-oxo-1-pyrrolidineacetamide UCB-L 059|Kea ; Levetiracetam

Dihomo-γ-Linolenic Acid etxyl ester 500 mg     8Z,11Z14Z-eicosatrienoic acid, etxyl ester etxyl DGLA; Dihomo-γ-Linolenic Acid etxyl ester

3-Decanone 5-xy7noxy-1-4-xy7noxy-3-metxoxypxenyl-, 5S-, 5-xy7noxy-1-4-xy7noxy-3-metxoxypxenyl-3-decanone     6-Gingerol
沙氏葡萄糖瓊脂250g用于化妝品中白色念球菌分離培養(yǎng)

乳糖復(fù)發(fā)酵培養(yǎng)基(乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基) 1000(g) incubation media 乳糖復(fù)發(fā)酵培養(yǎng)基(乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基) 1000(g)

TCBS瓊脂 TCBS Agar 250 用于霍亂、副溶弧菌的分離培養(yǎng)

醋酸鉛培養(yǎng)基250用于硫化氫試驗(yàn)incubationmedia醋酸鉛培養(yǎng)基250用于硫化氫試驗(yàn)

MIO培養(yǎng)基 250g 用于動(dòng)力、吲哚和*試驗(yàn)(FDA方法)
AntibioticAgar

酪胨-*-吐溫20液體培養(yǎng)基基礎(chǔ) 250(g) incubation media 酪胨-*-吐溫20液體培養(yǎng)基基礎(chǔ) 250(g)

KORSER氏檸檬酸鹽肉湯 Korser Citrate Sodium Broth 100 用于細(xì)菌的枸櫞酸鹽試驗(yàn)

四環(huán)素檢定瓊脂250用于四環(huán)素殘留的微生物學(xué)檢定(SN標(biāo)準(zhǔn))incubationmedia四環(huán)素檢定瓊脂250用于四環(huán)素殘留的微生物學(xué)檢定(SN標(biāo)準(zhǔn))

WagstsumaAgarBase
dNTP 溶液 ,10mM0.5mL保存MCP瓊脂250g用于產(chǎn)氣莢膜梭菌的計(jì)數(shù)和培養(yǎng)

Baird-Parker瓊脂基礎(chǔ) Baird-Parker Agar Base 用于*的選擇性分離培養(yǎng)(GBSN標(biāo)準(zhǔn))

布氏菌選擇性培養(yǎng)基 Brucella Selective Medium 250 用于布氏菌的選擇性分離培養(yǎng)

YM肉湯250g/瓶用于霉菌、酵母菌和其它耐酸菌的培養(yǎng)incubationmediaYM肉湯250g/瓶用于霉菌、酵母菌和其它耐酸菌的培養(yǎng)

LactoseBroth

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