剝離硅烷50mL保存詳細(xì)介紹：

剝離硅烷50mL保存產(chǎn)品及特點(diǎn):
尿素-聚丙烯酰胺凝膠電泳(Urea PAGE)是目前分離 200 nt 以下的小片段 RNA，尤其是 20 nt 左右的 microRNA(miRNA)分子的主要方法，但是單獨(dú) 配制各種溶液十分繁瑣，為此天澤基因開(kāi)發(fā)了本產(chǎn)品。它具有下列特點(diǎn): 1. 一站式，含有電泳所需要的所有試劑，即開(kāi)即用，十分方便，免去了 實(shí)驗(yàn)人員稱取有毒物品。 2. 靈活，可以根據(jù)需要配制各種濃度的 Urea-PAGE，以便對(duì)長(zhǎng)度各異 的 RNA 進(jìn)行電泳。 3. 電泳后可直接用于 UV 觀察、銀染、膠回收、Northern 雜交和放射自 顯影等。 4. 使用新型緩沖液，可以防止甘油的干擾。
剝離硅烷50mL保存使用方法：
一、準(zhǔn)備工作
1. 用固相 RNase 清除劑清潔工作的臺(tái)面和器皿（詳見(jiàn)該產(chǎn)品的使用手冊(cè)）。
2. 配制 1 X 電泳緩沖液 將適量的 10X 電泳緩沖液用 RNase-free 水稀釋 10 倍，得到 1X 電泳緩 沖液待用。
3. 配制 10%過(guò)硫酸銨溶液 精確稱取約 100 mg 過(guò)硫酸銨到一干凈的 1.5 mL 離心管中，按每 1 mg 過(guò)硫酸銨加 10 uL RNase-free 水的比例加入 RNase-free 水，搖晃致溶， 立即使用。注意：放置時(shí)間不要超過(guò)一周。
二、配制凝膠
1. 估計(jì)所需要的凝膠溶液的體積，一般配制一塊 13 cm X 15 cm X 0.8 mm 的膠需要 15 mL 凝膠溶液，配制一塊 36 cm X 45 cm X 0.8 mm 的膠 需要 120 mL 凝膠溶液。
2. 新鮮的 40%的丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺溶液的配制：在裝有 60g 丙烯酰 胺干粉的瓶中加入約 130 mL 自備的去離子水，然后將全部甲叉雙丙烯酰 胺加入到同一塑料瓶中（可以加少量丙烯酰胺溶液沖洗出來(lái)以避免粉末有 毒粉末飄出。甲叉雙丙烯酰胺溶解度低，不會(huì)溶解在這少量溶液中）。充 分搖晃混勻后所得溶液即 40%的 Acrylamide/Bis 溶液。配制 40%而非 30%的原因是這樣可以在下步留出足夠空間加尿素。
3. 根據(jù)所需要的凝膠溶液的體積，在一的干凈的三角瓶中按下表加入各成分
4. 攪拌并加熱到 40-50℃左右，直到尿素*溶解。
5. 冷卻到室溫后，將三角瓶接上真空系統(tǒng)抽真空處理 10-15 分鐘以充分去 除溶液中的氧氣（氧氣會(huì)降低聚合反應(yīng)效率）。但如果實(shí)驗(yàn)條件有限，此 步也可以省略。
6. 邊搖晃溶液變加入 50 uL TEMED 和 500 uL 10%過(guò)硫酸銨。注意：即 使選擇其他工作濃度的 Acrylamide/Bis，TEMED 和 10%過(guò)硫酸銨的用 量也不需要隨之改變。但如果配置的凝膠溶液的體積變化，TEMED 和 10%過(guò)硫酸銨的用量也要按比例改變。
7. 再充分搖晃約 30 秒后迅速灌膠，然后插入樣品梳。
8. 室溫放置 30-60 分鐘使膠凝固。
9. 將凝膠板放置在電泳裝置上后，在上下層分別加入適當(dāng)量的 1X 電泳緩沖 液。如果不馬上使用，需要有濕紙將上樣孔端蓋住以防凝膠過(guò)度干燥。
10. 拔出梳子后用加樣槍吸取電泳緩沖液，充分將每個(gè)加樣空中未聚合的 Acrylamide/Bis、尿素和氣泡吹打出來(lái)。
剝離硅烷50mL保存后續(xù)處理：
1. 染色觀察：將凝膠一面的玻璃板揭開(kāi)，直接用仍然附著在另一玻璃板上的 凝膠進(jìn)行各種染色，包括銀染（固定、漂洗、顯影和定影等步驟）、EB（每 100 mL 1×TBE 中加 20 uL 10mg/mL 的 EB 溶液）、天澤基因低毒核 酸染料 DNAgreen（每 100 mL 1×TBE 中加 10 uL DNAgreen 原液）。 UV 下觀察并拍照。
2. miRNA 回收：按上法用 EB 等染料染色后，UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置，切膠后進(jìn)行膠回收處理。
3. Northern 雜交：按上法用 EB 等染料染色后，UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置，切膠后電轉(zhuǎn)移到帶正電的尼龍膜上，然后進(jìn)行雜交處理。
4. 放射自顯影：如果 miRNA 樣品電泳前經(jīng)過(guò)同位素標(biāo)記，則將凝膠一面的 玻璃板揭開(kāi)，用濾紙將附著在另一玻璃板上的凝膠吸附過(guò)來(lái)，然后包上保 鮮膜，真空抽干，然后使膠跟 X 光片向?qū)χ眠M(jìn)行放射自顯影。
CM-H024人胰腺星狀細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

FZD4 Others Rat 大鼠 Frizzled-4 / FZD4 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

支氣管成纖維細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)

Daudi細(xì)胞，人白血病細(xì)胞 小鼠腎足細(xì)胞,Mouse podocyte細(xì)胞 骨骼肌細(xì)胞培養(yǎng)基SkMCM-prf

NCI-H157(人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

BEL-7404(人肝癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CM-M006小鼠肺成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL 人成骨肉瘤細(xì)胞;Saos-2
ITGA8 & ITGB1 Others Human 人 ITGA8 & ITGB1 Heterodimer 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

人毛細(xì)胞總RNAHHDPC tRNA

KYSE450 人食管癌細(xì)胞

CL-0328CEM/C1(人急性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

rEPC，大鼠內(nèi)皮祖細(xì)胞-骨髓

人皮膚成纖維樣細(xì)胞;HSF2 人子宮平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
人毛細(xì)胞總RNAHHDPC tRNA

ITGA8 & ITGB1 Others Human 人 ITGA8 & ITGB1 Heterodimer 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

KYSE450 人食管癌細(xì)胞

CL-0328CEM/C1(人急性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

rEPC，大鼠內(nèi)皮祖細(xì)胞-骨髓

人皮膚成纖維樣細(xì)胞;HSF2 人子宮平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
Anti-Nm23/FITC 熒光素標(biāo)記轉(zhuǎn)移抑制基因抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Anti-XAF1/FITC 熒光素標(biāo)記XIAP相關(guān)因子1凋亡抑制蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

B細(xì)胞遷移基因2抗體 Anti-BTG2/TIS21 0.1ml

Goat Anti-Chicken IgG/Bio *標(biāo)記的羊抗雞IgG 0.1ml

Furin 英文名稱： 弗林蛋白酶抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh PP2Ac/PP4C 磷酸酯酶-2Ac抗體 規(guī)格 0.1ml

Anti-XAF1/FITC 熒光素標(biāo)記XIAP相關(guān)因子1凋亡抑制蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Goat Anti-Chicken IgG/Gold 膠體金標(biāo)記的羊抗雞IgG 0.5ml

FABP12 英文名稱： 脂肪酸結(jié)合蛋白12抗體 0.2ml

BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白抗體 Anti-Bid 0.1ml

Anti-NK-2R/FITC 熒光素標(biāo)記神經(jīng)激肽A受體/K物質(zhì)受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh PPIL1 親環(huán)素相關(guān)蛋白1抗體 規(guī)格 0.2ml

Anti-WNK4/FITC 熒光素標(biāo)記一種新的*/*激酶家族成員的基因WNK4抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
剝離硅烷50mL保存BDNF 小鼠腦衍化神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-FDC-SP/ADC 濾泡樹(shù)突細(xì)胞分泌蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Mouse Anti-rat IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標(biāo)記的小鼠抗大鼠IgG 規(guī)格 0.1ml

EMA(Human Epithelial membrane antigen) ELISA Kit 人上皮膜抗原 96T

SLAP2 英文名稱： SLAP2抗體 0.1ml

C4orf27 英文名稱： 4號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框27抗體 0.2ml

Anti-FDC-SP/ADC 濾泡樹(shù)突細(xì)胞分泌蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml