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上海莼試生物技術(shù)有限公司
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瓊脂糖100g*

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更新時(shí)間:2017-07-14 13:24:19瀏覽次數(shù):154次

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瓊脂糖100g*使用方法 一、準(zhǔn)備工作 1. 用固相 RNase 清除劑清潔工作的臺(tái)面和器皿(詳見(jiàn)該產(chǎn)品的使用手冊(cè))。 2. 配制 1 X 電泳緩沖液 將適量的 10X 電泳緩沖液用 RNase-free 水稀釋 10 倍,得到 1X 電泳緩沖液待用。

瓊脂糖100g*詳細(xì)介紹:

瓊脂糖100g*產(chǎn)品及特點(diǎn):
尿素-聚丙烯酰胺凝膠電泳(Urea PAGE)是目前分離 200 nt 以下的小片段 RNA,尤其是 20 nt 左右的 microRNA(miRNA)分子的主要方法,但是單獨(dú) 配制各種溶液十分繁瑣,為此天澤基因開(kāi)發(fā)了本產(chǎn)品。它具有下列特點(diǎn): 1. 一站式,含有電泳所需要的所有試劑,即開(kāi)即用,十分方便,免去了 實(shí)驗(yàn)人員稱取有毒物品。 2. 靈活,可以根據(jù)需要配制各種濃度的 Urea-PAGE,以便對(duì)長(zhǎng)度各異 RNA 進(jìn)行電泳。 3. 電泳后可直接用于 UV 觀察、銀染、膠回收、Northern 雜交和放射自 顯影等。 4. 使用新型緩沖液,可以防止甘油的干擾。
瓊脂糖100g*使用方法:
一、準(zhǔn)備工作
1. 用固相 RNase 清除劑清潔工作的臺(tái)面和器皿(詳見(jiàn)該產(chǎn)品的使用手冊(cè))。
2. 配制 1 X 電泳緩沖液 將適量的 10X 電泳緩沖液用 RNase-free 水稀釋 10 倍,得到 1X 電泳緩 沖液待用。
3. 配制 10%過(guò)硫酸銨溶液 精確稱取約 100 mg 過(guò)硫酸銨到一干凈的 1.5 mL 離心管中,按每 1 mg 過(guò)硫酸銨加 10 uL RNase-free 水的比例加入 RNase-free 水,搖晃致溶, 立即使用。注意:放置時(shí)間不要超過(guò)一周。
二、配制凝膠
1. 估計(jì)所需要的凝膠溶液的體積,一般配制一塊 13 cm X 15 cm X 0.8 mm 的膠需要 15 mL 凝膠溶液,配制一塊 36 cm X 45 cm X 0.8 mm 的膠 需要 120 mL 凝膠溶液。
2. 新鮮的 40%的丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺溶液的配制:在裝有 60g 丙烯酰 胺干粉的瓶中加入約 130 mL 自備的去離子水,然后將全部甲叉雙丙烯酰 胺加入到同一塑料瓶中(可以加少量丙烯酰胺溶液沖洗出來(lái)以避免粉末有 毒粉末飄出。甲叉雙丙烯酰胺溶解度低,不會(huì)溶解在這少量溶液中)。充 分搖晃混勻后所得溶液即 40% Acrylamide/Bis 溶液。配制 40%而非 30%的原因是這樣可以在下步留出足夠空間加尿素。
3. 根據(jù)所需要的凝膠溶液的體積,在一的干凈的三角瓶中按下表加入各成分
4. 攪拌并加熱到 40-50左右,直到尿素*溶解。
5. 冷卻到室溫后,將三角瓶接上真空系統(tǒng)抽真空處理 10-15 分鐘以充分去 除溶液中的氧氣(氧氣會(huì)降低聚合反應(yīng)效率)。但如果實(shí)驗(yàn)條件有限,此 步也可以省略。
6. 邊搖晃溶液變加入 50 uL TEMED 500 uL 10%過(guò)硫酸銨。注意:即 使選擇其他工作濃度的 Acrylamide/Bis,TEMED 10%過(guò)硫酸銨的用 量也不需要隨之改變。但如果配置的凝膠溶液的體積變化,TEMED 10%過(guò)硫酸銨的用量也要按比例改變。
7. 再充分搖晃約 30 秒后迅速灌膠,然后插入樣品梳。
8. 室溫放置 30-60 分鐘使膠凝固。
9. 將凝膠板放置在電泳裝置上后,在上下層分別加入適當(dāng)量的 1X 電泳緩沖 液。如果不馬上使用,需要有濕紙將上樣孔端蓋住以防凝膠過(guò)度干燥。
10. 拔出梳子后用加樣槍吸取電泳緩沖液,充分將每個(gè)加樣空中未聚合的 Acrylamide/Bis、尿素和氣泡吹打出來(lái)。
瓊脂糖100g*后續(xù)處理:
1. 染色觀察:將凝膠一面的玻璃板揭開(kāi),直接用仍然附著在另一玻璃板上的 凝膠進(jìn)行各種染色,包括銀染(固定、漂洗、顯影和定影等步驟)、EB(每 100 mL 1×TBE 中加 20 uL 10mg/mL EB 溶液)、天澤基因低毒核 酸染料 DNAgreen(每 100 mL 1×TBE 中加 10 uL DNAgreen 原液)。 UV 下觀察并拍照。
2. miRNA 回收:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置,切膠后進(jìn)行膠回收處理。
3. Northern 雜交:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置,切膠后電轉(zhuǎn)移到帶正電的尼龍膜上,然后進(jìn)行雜交處理。
4. 放射自顯影:如果 miRNA 樣品電泳前經(jīng)過(guò)同位素標(biāo)記,則將凝膠一面的 玻璃板揭開(kāi),用濾紙將附著在另一玻璃板上的凝膠吸附過(guò)來(lái),然后包上保 鮮膜,真空抽干,然后使膠跟 X 光片向?qū)χ眠M(jìn)行放射自顯影。
牛腦垂體提取物BPE

GAP43 Others Human GAP43 / Neuromodulin 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

CHL-Don 中國(guó)倉(cāng)鼠肺成纖維樣細(xì)胞

CL-0046C4-2(人前列腺癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

HSC-T6, 大鼠肝星狀細(xì)胞系

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞(彝族);HYL 人腹膜毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
CLEC3B Others Human CLEC3B / Tetranectin 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

人內(nèi)根殼細(xì)胞cDNAHHIRSC cDNA

A9 小鼠皮下結(jié)締組織細(xì)胞

CL-0222SV-HUC-1(人膀胱上皮永生化細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

mOPC, 小鼠少突膠質(zhì)前體細(xì)胞

Sars結(jié)構(gòu)蛋白表達(dá)株;293 001A 人腎實(shí)質(zhì)細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
人內(nèi)根殼細(xì)胞cDNAHHIRSC cDNA

CLEC3B Others Human CLEC3B / Tetranectin 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

A9 小鼠皮下結(jié)締組織細(xì)胞

CL-0222SV-HUC-1(人膀胱上皮永生化細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

mOPC, 小鼠少突膠質(zhì)前體細(xì)胞

Sars結(jié)構(gòu)蛋白表達(dá)株;293 001A 人腎實(shí)質(zhì)細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
PY ELISA Kit 大鼠吡啶交聯(lián)物Multi-class antibodies規(guī)格: 48T

Anti-YBX-1 高保留轉(zhuǎn)錄因子抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml

Rhesus antibody Rh G protein beta 3/GNB3 G蛋白β3抗體/*核苷酸結(jié)合蛋白β亞基3 規(guī)格 0.2ml

HGF(Human hepatocyte growth factor) ELISA kit 人肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子 96T

NDST1 英文名稱: NDST1蛋白抗體 0.2ml

ARF5 英文名稱: ADP核糖基化因子5抗體 0.2ml

Anti-YBX-1 高保留轉(zhuǎn)錄因子抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Goat Anti-Chicken IgG/Cy5 Cy5標(biāo)記的羊抗雞IgG 0.1ml

FVT1 英文名稱: 濾泡型轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1/II型慢性淋巴性白血病抗體 0.2ml

癌易感基因1抗體 Anti-BRCA1 0.2ml

Anti-CD337/NKp30/NCR3/FITC 熒光素標(biāo)記細(xì)胞毒性受體NK-p30抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml

Rhesus antibody Rh PPAR alpha α型-過(guò)氧化酶活化增生受體抗體 規(guī)格 0.1ml

Anti-AT1R/AGTR1/FITC 熒光素標(biāo)記血管緊張素Ⅱ-1型受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
瓊脂糖100g*M-CSF 小鼠巨噬細(xì)胞-集落刺激因子Multi-class antibodies規(guī)格: 48T

Anti-phospho-FAK (Ser732) 磷酸化粘著斑激酶抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml

Rhesus antibody Rh Mouse Anti-rat IgG/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標(biāo)記的小鼠抗大鼠IgG 規(guī)格 0.1ml

VC(Human Vitamin C) ELISA Kit 人維生素C 96T

Slc22A17 英文名稱: 可溶性載質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白22A17抗體 0.1ml

CST9 英文名稱: 胱抑素9/半胱酸蛋白酶抑制劑9抗體 0.2ml

Anti-phospho-FAK (Ser732) 磷酸化粘著斑激酶抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml

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