當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>蛋白提取/檢測>> *蛋白酶抑制劑1ml實驗方法
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更新時間:2017-07-10 12:23:46瀏覽次數(shù):276次
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(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標(biāo)記時,盡可能在暗處進行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4℃下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
(5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
*蛋白酶抑制劑1ml實驗方法實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細(xì)胞懸液每50~100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻資料決定。
3、對于懸浮細(xì)胞:
(1)取 10~60 萬細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細(xì)胞儀分析。
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FGF21 Protein Mouse 重組小鼠 FGF21 / Fibroblast Growth Factor 21 蛋白 (His 標(biāo)簽)
大鼠結(jié)腸平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
CLEC4D Others Rat 大鼠 CLEC4D / CLECSF8 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
CHL倉鼠肺細(xì)胞 CHL hamster lung cells DMEM培養(yǎng)基+10%FBS
人星形膠質(zhì)細(xì)胞HA
C3H/10T1/2, Clone 8(小鼠胚胎成纖維細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 人支氣管平滑肌細(xì)胞HBSMC
CM-M018小鼠頜下腺上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
COLEC11 Others Mouse 小鼠 CL-K1 / COLEC11 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
滋養(yǎng)層細(xì)胞培養(yǎng)基TM
猴源細(xì)胞 T細(xì)胞白血病,6T-CEM細(xì)胞 COLO-320(結(jié)腸腺癌細(xì)胞)
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMY0909
GHR Others Mouse 小鼠 GHR / GHBP 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
ACVR1 Others Canine 狗 ALK-2 / ACVR1 / ALK2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
人永生化表皮細(xì)胞;HaCaT
非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-NS4B;Vero-HCV-NS4B
LS174T細(xì)胞,人結(jié)腸癌細(xì)胞 人黑色素瘤細(xì)胞,SK37細(xì)胞 人成骨肉瘤細(xì)胞;Saos-2
HCT 116(人結(jié)腸癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
APOA1 Others Human 人 ApoAI 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
大鼠粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人神經(jīng)絲蛋白L(NF-L)免疫試劑盒 Human Neurofilament protein L,NF-L ELISA kit
MouseHeatShockProteinglycoprotein96,HSPgp96ELISAKit小鼠熱休克蛋白糖蛋白96(HSPgp96)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
ANDROGENRECEPTOR蛋白表達西方雜交分析試劑盒5次
Humanmembraneattackcomplex,MACELISA試劑盒人膜攻擊復(fù)合物(MAC)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Humanplasmin-antiplasmincomplex,PAPELISAKit人纖溶酶抗纖溶酶復(fù)合物(PAP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
人誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶(iNOS)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human recombination activating gene 1 (RAG-1) ELISA Kit 人重組激活基因1(RAG-1)ELISA試劑盒
HumanC-Polypeptide,CPELISAKit 人C多肽(CP)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
Humaninsulin-likegrowthfactorsbindingprotein4,IGFBP-4ELISA試劑盒人胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白4(IGFBP-4)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織甲基化組蛋白H3-K4染色質(zhì)免疫沉淀分析(CHIP)試劑盒10次
HumanLactoferrin,LTF/LFELISAKit人乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白(LF/LTF)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
*蛋白酶抑制劑1ml實驗方法96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠補體蛋白4(C4)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠補體蛋白3(C3)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠補體5a(C5a)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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