當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>蛋白提取/檢測>> 包涵體溶解液50ml實驗方法
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更新時間:2017-07-10 12:19:18瀏覽次數(shù):196次
聯(lián)系我時,請告知來自 儀表網(wǎng)包涵體溶解液50ml實驗方法實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細(xì)胞懸液每50~100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對于懸浮細(xì)胞:
(1)取 10~60 萬細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細(xì)胞儀分析。
包涵體溶解液50ml實驗方法注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標(biāo)記時,盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4℃下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
(5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進(jìn)行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
成纖維細(xì)胞生長因子
大鼠腸靜脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
IL2RG Others Rat 大鼠 IL2RG / CD132 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
SUP-B15人Ph+急淋白血病細(xì)胞系 SUP-B15 acute lymphoblastic leukemia cell line Ph+ IMDM培養(yǎng)基(GIBCO)+20%FBS
人心臟成纖維細(xì)胞HCF
293FT(人胚腎細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 支氣管成纖維細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
多聚賴氨酸10 mg/mlPLL
CRELD2 Others Mouse 小鼠 CRELD2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
白介素-2轉(zhuǎn)染耐VP16絨癌細(xì)胞;JEG-3/VP16-IL-2
雜交瘤(B類);Z172A4C4C6F3G12 Burkitt's 淋巴瘤細(xì)胞,Raji細(xì)胞 HBZY-1細(xì)胞,大鼠腎小球系膜細(xì)胞EC(HBZY-1)
UM-UC-3, 人膀胱移行細(xì)胞癌 Human
LILRB3 Others Human 人 LILRB3 / LIR3 / ILT5 / CD85a 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
TNFRSF4 Others Mouse 小鼠 TNFRSF4 / OX40 / CD134 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
人羊膜細(xì)胞;WISH
HeLa 229 人細(xì)胞
EA.hy926人臍靜脈細(xì)胞融合細(xì)胞 EA.hy926 human umbilical vein cell fusion cells DMEM培養(yǎng)基+10%FBS
TNFSF9 Protein Mouse 重組小鼠 4-1BBL / CD137L / TNFSF9 蛋白 (His 標(biāo)簽)
大鼠條紋神經(jīng)元(RNs)(1×106) C6, 大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞 Rattus
大鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人神經(jīng)營養(yǎng)因子3(NT-3)免疫試劑盒 Human Neurotrophin-3,NT-3 ELISA KIT
Mousegrowthhormonereleasingpeptide-Ghrelin,GHRP-GhrelinELISAKit小鼠生長激素釋放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
通用型南芥菜花葉病毒(ArabisMosaicVirus;ArMV)基因檢測試劑盒20次
Humanmelanocyteantibody,MCAbELISA試劑盒人黑色素細(xì)胞抗體(MCAb)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Humanplacentalprotein,PPELISAKit人胎盤蛋白(PP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
人載脂蛋白E(Apo-E)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human TNF related activation induced cytokine (TRANCE) ELISA Kit 人壞死因子相關(guān)激活誘導(dǎo)因子(TRANCE)ELISA試劑盒
Humaninterferon-inducibleprotein16,IFI16/p16ELISAKit 人γ干擾素誘導(dǎo)蛋白16/p16(IFI16/p16)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
HumanInhibin,INHELISA試劑盒人抑制素(INH)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-7)活性熒光定量檢測試劑盒20次
HumanLeptinReceptor,LEPRELISAKit人瘦素受體(LEPR)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
包涵體溶解液50ml實驗方法大鼠二胺氧化酶(DAO)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠兒茶酚胺(CA)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠多巴胺轉(zhuǎn)運蛋白(DAT)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠多巴胺D2受體(D2R)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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