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Western轉(zhuǎn)移緩沖液(5X),NC 500ml實(shí)驗(yàn)方法

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Western轉(zhuǎn)移緩沖液(5X,NC 500ml實(shí)驗(yàn)方法CCL15 Protein Human 重組人 CCL15 / MIP-5 / MIP-1 delta 蛋白 (aa 46-113, His 標(biāo)簽)

人肝動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL

CCDC47 Others Human CCDC47 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

P815細(xì)胞,小鼠肥大細(xì)胞癌細(xì)胞 V79-4(中國(guó)倉(cāng)鼠肺細(xì)胞) 非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-C;Vero-HCV-C

人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;COLO 320DM [COLO320DM]

QGY-7701(人肝癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 大鼠 EphA3 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

Western轉(zhuǎn)移緩沖液(5X,NC 500ml實(shí)驗(yàn)方法使用注意事項(xiàng)
1.微量試劑取用前請(qǐng) 離心集液。
27-AAD避光保存及使用。
37-AAD為潛在致癌物,操作時(shí)請(qǐng)采取防護(hù)措施,穿*、戴手套等。
4.本試劑盒適用于檢測(cè)活細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí),細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105,,不*用于檢測(cè)組織樣本。
Western轉(zhuǎn)移緩沖液(5X,NC 500ml實(shí)驗(yàn)方法操作方法
1.懸浮細(xì)胞離心(2000rpm離心5min)收集;貼壁細(xì)胞用*消化收集用PBS洗滌細(xì)胞二次(2000rpm離心5min)收集1~5×105細(xì)胞;
2.加入5μL 7-AAD染液,混勻;室溫、避光、反應(yīng)515min;
3.加入500μL1×Assays Buffer懸浮細(xì)胞;
4.請(qǐng)?jiān)?/span>1 hour內(nèi),進(jìn)行下述熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的觀察和檢測(cè)。
A.熒光顯微鏡觀察
1.滴一滴上述染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上,并用蓋玻片蓋上細(xì)胞;
2.對(duì)于貼壁細(xì)胞來(lái)說(shuō),也可直接用蓋玻片來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡;
1)將細(xì)胞于蓋玻片上生長(zhǎng),用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,并設(shè)立陰性對(duì)照組;
2)用PBS洗滌細(xì)胞兩次;
3)在500μL 1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液,混勻;
4)將上述溶液滴加于蓋玻片表面,使長(zhǎng)有細(xì)胞的蓋玻片表面均勻覆蓋;
5)避光、室溫反應(yīng)5 min。
3.將蓋玻片倒置于載玻片上,于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長(zhǎng)546nm,發(fā)射波長(zhǎng)647 nm,7-AAD熒光信號(hào)呈紅色。
B.流式細(xì)胞儀分析
用流式細(xì)胞儀檢測(cè),激發(fā)波長(zhǎng)Ex=546 nm; 發(fā)射波長(zhǎng)Em=647 nm
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測(cè)。
Western轉(zhuǎn)移緩沖液(5X,NC 500ml實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)步驟
貼壁細(xì)胞需用0.25%的*消化。注意過(guò)度消化可損傷細(xì)胞。在消化時(shí)可加2%的BSA可防止消化過(guò)度。如果用含EDTA的*消化時(shí),注意必須*清除EDTA:在標(biāo)記前用1×PBS1×bindingbuffer洗滌,清除EDTA,以免殘余的EDTACa2+螯合,影響Annexin V的結(jié)合。
1)用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer
2)細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集:離心5分鐘;貼壁細(xì)胞:用不含EDTA的*消化收集后(注:*消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),否則會(huì)影響細(xì)胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合),于室溫2000rpm離心510分鐘,收集細(xì)胞;
3)細(xì)胞洗滌:用預(yù)冷1×PBS4)重懸細(xì)胞一次,2000rpm離心510分鐘,洗滌細(xì)胞;
4)加入300μL 1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞;
5Annexin V-FITC標(biāo)記:加入5μLAnnexin V-FITC混勻后,避光,室溫孵育15分鐘;
6PI標(biāo)記:上機(jī)前5分鐘再加入5μLPI染色。
7)上機(jī)前,補(bǔ)加200μL1×Binding Buffer。
CL-00074T1(小鼠癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

EFNA5 Others Rat 大鼠 Ephrin-A5 / EFNA5 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

小鼠子宮平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL

TM3小鼠間質(zhì)細(xì)胞 TM3 mouse Leydig cells D-MEM/F-12培養(yǎng)基(GIBCO)+5%馬血清+2.5%FBS

IL20 Protein Human 重組人 IL20 / Interleukin-20 蛋白

SNU-5(人胃癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 293(轉(zhuǎn)染腺病毒E1A基因的人腎上皮細(xì)胞)
IL4R Others Rat 大鼠 IL4R / Il4ra 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

人神經(jīng)細(xì)胞HM

大鼠小腸粘膜上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL

K-562人慢性髓原白血病細(xì)胞 K-562 chronic myelogenous leukemia cells 1640+10% FBS

FGF21 Protein Human 重組人 FGF21 蛋白 (His 標(biāo)簽)

Caki-2(人腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 人腎小管上皮細(xì)胞HRPTEpiC
大鼠前心鈉肽(Pro-ANP)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

人髓磷脂P2蛋白(PMP2)免疫試劑盒 Human Myelin P2 protein,PMP2 ELISA kit

Na+k+ ——ATP酶測(cè)試盒 可見(jiàn)分光光度法 50/24

RatTumornecrosisfactorsolublereceptor,TNFsR-ELISA試劑盒大鼠腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅱ(TNFsR-)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

Humanliverspecificlipoprotein,LSPELISA試劑盒人抗肝特異性脂蛋白抗體(LSP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

HumanovalbuminspecificIgE,OVAsIgEELISAKit人卵清蛋白特異性IgE(OVAsIgE)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
兔*(ADR)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Human insulin-like growth factor 2 (IGF-2) ELISA Kit 人胰島素樣生長(zhǎng)因子2(IGF-2)ELISA試劑盒

Humananti-typhusantibodyELISAKit 人抗斑疹傷寒抗體(anti-typhus-Ab)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humanglycosylation-dependentcelladhesionmolecule-1,GlyCAM-1ELISA試劑盒人糖基化依賴的細(xì)胞黏附分子(GlyCAM-1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

組織丁酰*酯酶活性化學(xué)發(fā)光法定量檢測(cè)試劑盒20

humanmitogenactivatedproteinkinasekinase6,MKK6ELISAKit人原活化蛋白激酶激酶6(MKK6)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Western轉(zhuǎn)移緩沖液(5X,NC 500ml實(shí)驗(yàn)方法猴載脂蛋白A1(apo-A1)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

猴胰島素(INS)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

猴可溶性血管細(xì)胞粘附分子1(sVCAM-1)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

猴可溶性細(xì)胞間粘附分子1(sICAM-1)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

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