當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>蛋白提取/檢測>> 轉(zhuǎn)膜液(Western),NC 100ml使用說明書
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更新時間:2017-07-10 09:51:35瀏覽次數(shù):140次
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1.微量試劑取用前請離心集液。
2.7-AAD避光保存及使用。
3.7-AAD為潛在致癌物,操作時請采取防護(hù)措施,穿*、戴手套等。
4.本試劑盒適用于檢測活細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測時,細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105,,不*用于檢測組織樣本。
轉(zhuǎn)膜液(Western),NC 100ml使用說明書操作方法
1.懸浮細(xì)胞離心(2000rpm離心5min)收集;貼壁細(xì)胞用*消化收集用PBS洗滌細(xì)胞二次(2000rpm離心5min)收集1~5×105細(xì)胞;
2.加入5μL 7-AAD染液,混勻;室溫、避光、反應(yīng)5~15min;
3.加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細(xì)胞;
4.請在1 hour內(nèi),進(jìn)行下述熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的觀察和檢測。
A.熒光顯微鏡觀察
1.滴一滴上述染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上,并用蓋玻片蓋上細(xì)胞;
2.對于貼壁細(xì)胞來說,也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡;
(1)將細(xì)胞于蓋玻片上生長,用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,并設(shè)立陰性對照組;
(2)用PBS洗滌細(xì)胞兩次;
(3)在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液,混勻;
(4)將上述溶液滴加于蓋玻片表面,使長有細(xì)胞的蓋玻片表面均勻覆蓋;
(5)避光、室溫反應(yīng)5 min。
3.將蓋玻片倒置于載玻片上,于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長546nm,發(fā)射波長647 nm,7-AAD熒光信號呈紅色。
B.流式細(xì)胞儀分析
用流式細(xì)胞儀檢測,激發(fā)波長Ex=546 nm; 發(fā)射波長Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測。
轉(zhuǎn)膜液(Western),NC 100ml使用說明書實驗步驟
貼壁細(xì)胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細(xì)胞。在消化時可加2%的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時,注意必須*清除EDTA:在標(biāo)記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌,清除EDTA,以免殘余的EDTA與Ca2+螯合,影響Annexin V的結(jié)合。
(1)用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer;
(2)細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集:離心5分鐘;貼壁細(xì)胞:用不含EDTA的*消化收集后(注:*消化時間不宜過長,否則會影響細(xì)胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合),于室溫2000rpm離心5~10分鐘,收集細(xì)胞;
(3)細(xì)胞洗滌:用預(yù)冷1×PBS(4℃)重懸細(xì)胞一次,2000rpm離心5~10分鐘,洗滌細(xì)胞;
(4)加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞;
(5)Annexin V-FITC標(biāo)記:加入5μL的Annexin V-FITC混勻后,避光,室溫孵育15分鐘;
(6)PI標(biāo)記:上機(jī)前5分鐘再加入5μL的PI染色。
(7)上機(jī)前,補(bǔ)加200μL的1×Binding Buffer。
CXCL12 Protein Human 重組人 CXCL12 / SDF-1 蛋白 (isoform a, His 標(biāo)簽)
人肝實質(zhì)細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
TMED1 Others Human 人 TMED1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
L6565細(xì)胞,小鼠白血病克隆細(xì)胞系 破傷風(fēng)桿菌/梭菌Clostridium tetani 猴脈絡(luò)膜-視網(wǎng)膜(內(nèi)皮)細(xì)胞;RF/6A
人細(xì)胞;Hela S3 [HeLaS3]
PIEC(豬髖動脈內(nèi)皮細(xì)胞 ) 5×106cells/瓶×2 食蟹猴 CD10 / Neprilysin / MME 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
皮膚肥大細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
EFNB1 Others Rat 大鼠 Ephrin-B1 / EFNB1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
大鼠腎管狀上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
Y3-Ag 1.2.3大鼠骨髓瘤細(xì)胞 Myeloma cells in Y3-Ag 1.2.3 rats DMEM培養(yǎng)基+10%FBS
IGFBP3 Protein Human 重組人 IGFBP3 / IBP3 蛋白 (His 標(biāo)簽)
hFOB 1.19(SV40轉(zhuǎn)染人成骨細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 產(chǎn)氣腸桿菌
ACOX1 Others Human 人 ACOX1 / aox 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
人神經(jīng)束膜細(xì)胞RNAHPC miRNA5 μg
兔源細(xì)胞
AsPC-1細(xì)胞,轉(zhuǎn)移胰腺腺癌細(xì)胞 CoC1細(xì)胞耐藥亞株,CoC1/DDP細(xì)胞 人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞;NCI-H23
小鼠黑色素瘤細(xì)胞;B16-F1
TNFRSF1B Others Human 人 TNFRSF1B / TNFR2 / CD120b 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
大鼠羥脯酸(Hyp)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人髓磷脂堿性蛋白(MBP)免疫試劑盒 Human MBP ELISA Kit
*-N-脫甲基酶(ERND)測試盒 微量法 100管/48樣
RatTumornecrosisfactorsolublereceptorⅠ,TNFsR-ⅠELISA試劑盒大鼠腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Humanliverkidneymicrosomeautoantibody,LKMELISA試劑盒人抗肝腎微粒體抗體(LKM)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanOsteoprotegerin,OPGELISAKit人骨保護(hù)素(OPG)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
兔白介素17(IL-17)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human insulin-like growth factor 1 (IGF-1) ELISA Kit 人胰島素樣生長因子1(IGF-1)ELISA試劑盒
HumanMycoplasmapneumoniaeantibody,MP-AbELISAKit 人肺炎支原體抗體(MP-Ab)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
Humanglycosaminoglycan,GAGELISA試劑盒人糖胺聚糖(GAG)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織丁酰*酯酶活性比色法定量檢測試劑盒20次
Humanmitogen-activatedproteinkinase-activatedproteinkinase3,MAPKAPK3ELISAKit人促分裂素原活化蛋白激酶激活的蛋白激酶3(MAPKAPK3)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
轉(zhuǎn)膜液(Western),NC 100ml使用說明書單核細(xì)胞趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
促卵泡素(FSH)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
層連蛋白/板層素(LN)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
白三烯C4(LTC4)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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