通用定影液500ml實(shí)驗(yàn)方法使用注意事項(xiàng)
1．微量試劑取用前請離心集液。
2．7-AAD避光保存及使用。
3．7-AAD為潛在致癌物，操作時請采取防護(hù)措施，穿*、戴手套等。
4．本試劑盒適用于檢測活細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測時，細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105，，不*用于檢測組織樣本。
通用定影液500ml實(shí)驗(yàn)方法操作方法
1．懸浮細(xì)胞離心（2000rpm離心5min）收集；貼壁細(xì)胞用*消化收集用PBS洗滌細(xì)胞二次（2000rpm離心5min）收集1~5×105細(xì)胞；
2．加入5μL 7-AAD染液，混勻；室溫、避光、反應(yīng)5～15min；
3．加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細(xì)胞；
4．請?jiān)?/span>1 hour內(nèi)，進(jìn)行下述熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的觀察和檢測。
A．熒光顯微鏡觀察
1．滴一滴上述染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上，并用蓋玻片蓋上細(xì)胞；
2．對于貼壁細(xì)胞來說，也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；
（1）將細(xì)胞于蓋玻片上生長，用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并設(shè)立陰性對照組；
（2）用PBS洗滌細(xì)胞兩次；
（3）在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液，混勻；
（4）將上述溶液滴加于蓋玻片表面，使長有細(xì)胞的蓋玻片表面均勻覆蓋；
（5）避光、室溫反應(yīng)5 min。
3．將蓋玻片倒置于載玻片上，于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長546nm，發(fā)射波長647 nm，7-AAD熒光信號呈紅色。
B．流式細(xì)胞儀分析
用流式細(xì)胞儀檢測，激發(fā)波長Ex=546 nm; 發(fā)射波長Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測。
通用定影液500ml實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)步驟
貼壁細(xì)胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細(xì)胞。在消化時可加2％的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時，注意必須*清除EDTA：在標(biāo)記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌，清除EDTA，以免殘余的EDTA與Ca2＋螯合，影響Annexin V的結(jié)合。
（1）用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer；
（2）細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集：離心5分鐘；貼壁細(xì)胞：用不含EDTA的*消化收集后（注：*消化時間不宜過長，否則會影響細(xì)胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合），于室溫2000rpm離心5～10分鐘，收集細(xì)胞；
（3）細(xì)胞洗滌：用預(yù)冷1×PBS（4℃）重懸細(xì)胞一次，2000rpm離心5～10分鐘，洗滌細(xì)胞；
（4）加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞；
（5）Annexin V-FITC標(biāo)記：加入5μL的Annexin V-FITC混勻后，避光，室溫孵育15分鐘；
（6）PI標(biāo)記：上機(jī)前5分鐘再加入5μL的PI染色。
（7）上機(jī)前，補(bǔ)加200μL的1×Binding Buffer。
CXCL12 Protein Mouse 重組小鼠 CXCL12 / SDF-1 蛋白

人胰腺上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL

BAMBI Others Mouse 小鼠 BAMBI / NMA 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

HEF細(xì)胞，人胚纖維細(xì)胞系 奇異變形桿菌 中國倉鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);CHO-DUKXB11-TGF-β Dinding Protein cDNA

小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞;PUMC-mips-A5

Neuro-2a/N2a(小鼠腦神經(jīng)瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 中東呼吸綜合征冠狀病毒 MERS-CoV (HCoV-EMC/2012) Spike Protein fragment (aa 367-606) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
T-112A*(含10mL酶解緩沖液)1mL

EGFR Others Mouse 小鼠 EGFR / HER1 / ErbB1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

小鼠卵巢上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL

F98大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞 F98 rat glioma cells DMEM+10%FBS

IL24 Protein Human 重組人 IL-24 / MDA-7 蛋白 (His 標(biāo)簽)

Sp2/0-Ag14(小鼠骨髓瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 C6(腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞)
FCGR2B Others Rat 大鼠 CD32b / FCGR2B 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

人上皮細(xì)胞HMEpiC

HFL1 人肺成纖維細(xì)胞

CM-R043大鼠小腸平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

U251人膠質(zhì)瘤細(xì)胞

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;HH-29 人腦膜細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
小鼠Ⅲ型膠原(COL3)ELISA試劑盒 ，英文名： COL3 ELISA Kit

人胎盤催乳素(HPL)ELISA檢測試劑盒Humanplacentalactogen,HPLELISAKit 96T/48T

大鼠芳烴受體核轉(zhuǎn)位因子樣蛋白1(ARNTL)免疫試劑盒 Rat Aryl hydrocarbon receptor nuclear translocator-like protein 1,ARNTL ELISA kit

CLIAKitforUGT2B4(Humanuridinedipho-sphateglucuronosyltransferase2familypolypeptideB4)ELISAKit人二磷酸尿核苷葡糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶2家族肽B4規(guī)格：48T/96T

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兔基質(zhì)金屬蛋白酶2/明膠酶A(MMP-2/Gelatinase A)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

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HumanToxoplasmaGondii,T.gondiiELISAKit 人剛地弓形蟲(T.gondii)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

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