植物膜蛋白提取試劑盒（2D電泳用）50T實(shí)驗(yàn)方法使用注意事項(xiàng)
1．微量試劑取用前請(qǐng)離心集液。
2．7-AAD避光保存及使用。
3．7-AAD為潛在致癌物，操作時(shí)請(qǐng)采取防護(hù)措施，穿*、戴手套等。
4．本試劑盒適用于檢測(cè)活細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)，細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105，，不*用于檢測(cè)組織樣本。
植物膜蛋白提取試劑盒（2D電泳用）50T實(shí)驗(yàn)方法操作方法
1．懸浮細(xì)胞離心（2000rpm離心5min）收集；貼壁細(xì)胞用*消化收集用PBS洗滌細(xì)胞二次（2000rpm離心5min）收集1~5×105細(xì)胞；
2．加入5μL 7-AAD染液，混勻；室溫、避光、反應(yīng)5～15min；
3．加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細(xì)胞；
4．請(qǐng)?jiān)?/span>1 hour內(nèi)，進(jìn)行下述熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的觀察和檢測(cè)。
A．熒光顯微鏡觀察
1．滴一滴上述染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上，并用蓋玻片蓋上細(xì)胞；
2．對(duì)于貼壁細(xì)胞來說，也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；
（1）將細(xì)胞于蓋玻片上生長，用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并設(shè)立陰性對(duì)照組；
（2）用PBS洗滌細(xì)胞兩次；
（3）在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液，混勻；
（4）將上述溶液滴加于蓋玻片表面，使長有細(xì)胞的蓋玻片表面均勻覆蓋；
（5）避光、室溫反應(yīng)5 min。
3．將蓋玻片倒置于載玻片上，于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長546nm，發(fā)射波長647 nm，7-AAD熒光信號(hào)呈紅色。
B．流式細(xì)胞儀分析
用流式細(xì)胞儀檢測(cè)，激發(fā)波長Ex=546 nm; 發(fā)射波長Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測(cè)。
植物膜蛋白提取試劑盒（2D電泳用）50T實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)步驟
貼壁細(xì)胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細(xì)胞。在消化時(shí)可加2％的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時(shí)，注意必須*清除EDTA：在標(biāo)記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌，清除EDTA，以免殘余的EDTA與Ca2＋螯合，影響Annexin V的結(jié)合。
（1）用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer；
（2）細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集：離心5分鐘；貼壁細(xì)胞：用不含EDTA的*消化收集后（注：*消化時(shí)間不宜過長，否則會(huì)影響細(xì)胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合），于室溫2000rpm離心5～10分鐘，收集細(xì)胞；
（3）細(xì)胞洗滌：用預(yù)冷1×PBS（4℃）重懸細(xì)胞一次，2000rpm離心5～10分鐘，洗滌細(xì)胞；
（4）加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞；
（5）Annexin V-FITC標(biāo)記：加入5μL的Annexin V-FITC混勻后，避光，室溫孵育15分鐘；
（6）PI標(biāo)記：上機(jī)前5分鐘再加入5μL的PI染色。
（7）上機(jī)前，補(bǔ)加200μL的1×Binding Buffer。
U14(小鼠子細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

C57BL/6小鼠脂肪間質(zhì)干細(xì)胞 C57BL/6 mouse adipose mesenchymal stem cells

RCN3 Others Human 人 RCN3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)

FBM細(xì)胞，胎兒骨髓間充質(zhì)細(xì)胞 嬰兒雙歧桿菌 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞(拉祜族);KM9406

人胚肺二倍體細(xì)胞;HL

HT-29(人結(jié)腸癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 NCI-N87 [N87]人胃癌細(xì)胞 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMYM
人胰腺腺泡上皮癌;HPAC

EPHB4 Others Human 人 EphB4 / HTK (aa 563-987) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)

RDFs, 大鼠真皮成纖維細(xì)胞

rRTEC, 大鼠腎小管上皮細(xì)胞 [CIP 104786]細(xì)胞 293 [HEK-293] (人胚腎細(xì)胞)

人T淋巴瘤轉(zhuǎn)基因細(xì)胞;Jurkat D,E

CD5 Others Mouse 小鼠 CD5 / LEU1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)
EED Others Human 人 EED / Embryonic Ectoderm Development 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)

人前列腺平滑肌細(xì)胞cDNAHPSMC cDNA

雜交瘤(B類);C3110D2B2

BT549細(xì)胞，管癌細(xì)胞 人喉癌細(xì)胞,M4e細(xì)胞 大鼠胚胎心肌細(xì)胞;H9c2(2-1)

小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞;PUMC-mips-A4

NCR3 Others Human 人 NKp30 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)
小鼠Klotho蛋白(KL)ELISA試劑盒 ，英文名： KL ELISA Kit

人糖原合成酶激酶(GSK)ELISA檢測(cè)試劑盒Humanglycogensynthasekinase,GSKELISAKit 96T/48T

大鼠骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPR-Ⅱ)免疫試劑盒 Rat Bone morphogenetic protein receptor Ⅱ,BMPR-Ⅱ ELISA Kit

CLIAKitforVZV-IgM(HumanVaricellazostervirusIgMELISAKit人水痘帶狀皰疹病毒IgM規(guī)格：48T/96T

羅丹明123(RHODANMINE123)溶液(50微摩爾)0.5毫升

ELISAKitIgA*A規(guī)格：48T/96T
兔脂蛋白α(Lp-α)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Rat plaet derived growth factor AB (PDGF-AB) ELISA Kit 大鼠血小板衍生生長因子AB(PDGF-AB)ELISA試劑盒

HumanProteinkinaseA,PKAELISAKit 人蛋白激酶A(PKA)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humanfibronectionrelatedantigen,FRAELISA試劑盒人纖維連接素相關(guān)抗原(FRA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織氨含量熒光定量檢測(cè)試劑盒20次

Humanneutrophilicalkalinephosphatase,NAPELISAKit人中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶(NAP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
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