細(xì)胞凍存用DMSO（無菌）50ml實(shí)驗(yàn)方法使用注意事項(xiàng)
1．微量試劑取用前請(qǐng)離心集液。
2．7-AAD避光保存及使用。
3．7-AAD為潛在致癌物，操作時(shí)請(qǐng)采取防護(hù)措施，穿*、戴手套等。
4．本試劑盒適用于檢測活細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測時(shí)，細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105，，不*用于檢測組織樣本。
細(xì)胞凍存用DMSO（無菌）50ml實(shí)驗(yàn)方法操作方法
1．懸浮細(xì)胞離心（2000rpm離心5min）收集；貼壁細(xì)胞用*消化收集用PBS洗滌細(xì)胞二次（2000rpm離心5min）收集1~5×105細(xì)胞；
2．加入5μL 7-AAD染液，混勻；室溫、避光、反應(yīng)5～15min；
3．加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細(xì)胞；
4．請(qǐng)?jiān)?/span>1 hour內(nèi)，進(jìn)行下述熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的觀察和檢測。
A．熒光顯微鏡觀察
1．滴一滴上述染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上，并用蓋玻片蓋上細(xì)胞；
2．對(duì)于貼壁細(xì)胞來說，也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；
（1）將細(xì)胞于蓋玻片上生長，用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并設(shè)立陰性對(duì)照組；
（2）用PBS洗滌細(xì)胞兩次；
（3）在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液，混勻；
（4）將上述溶液滴加于蓋玻片表面，使長有細(xì)胞的蓋玻片表面均勻覆蓋；
（5）避光、室溫反應(yīng)5 min。
3．將蓋玻片倒置于載玻片上，于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長546nm，發(fā)射波長647 nm，7-AAD熒光信號(hào)呈紅色。
B．流式細(xì)胞儀分析
用流式細(xì)胞儀檢測，激發(fā)波長Ex=546 nm; 發(fā)射波長Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測。
細(xì)胞凍存用DMSO（無菌）50ml實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)步驟
貼壁細(xì)胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細(xì)胞。在消化時(shí)可加2％的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時(shí)，注意必須*清除EDTA：在標(biāo)記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌，清除EDTA，以免殘余的EDTA與Ca2＋螯合，影響Annexin V的結(jié)合。
（1）用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer；
（2）細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集：離心5分鐘；貼壁細(xì)胞：用不含EDTA的*消化收集后（注：*消化時(shí)間不宜過長，否則會(huì)影響細(xì)胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合），于室溫2000rpm離心5～10分鐘，收集細(xì)胞；
（3）細(xì)胞洗滌：用預(yù)冷1×PBS（4℃）重懸細(xì)胞一次，2000rpm離心5～10分鐘，洗滌細(xì)胞；
（4）加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞；
（5）Annexin V-FITC標(biāo)記：加入5μL的Annexin V-FITC混勻后，避光，室溫孵育15分鐘；
（6）PI標(biāo)記：上機(jī)前5分鐘再加入5μL的PI染色。
（7）上機(jī)前，補(bǔ)加200μL的1×Binding Buffer。
SK-MEL-1(人皮膚黑色素瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

Balb/c小鼠骨髓間質(zhì)干細(xì)胞 Balb/c mouse bone marrow mesenchymal stem cells

KDR Others Rat 大鼠 VEGFR2 / Flk-1 / CD309 / KDR 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)

H4細(xì)胞，人腦神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞(H4) 腸炎沙門氏菌 人心臟成纖維細(xì)胞-心室RNAHCF-av miRNA5 μg

人髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞;D341Med

HEC-1-A(人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0410P3X63Ag8.653(小鼠骨髓瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 獼猴皮膚細(xì)胞;MMS7
GBC-SD, 人膽囊癌細(xì)胞

ERBB4 Others Human 人 / 恒河猴 HER4 / ErbB4 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)

大鼠腦動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL

Hs 746T人胃癌細(xì)胞 Hs human gastric cancer cells 746T DMEM+10% FBS

IFNA10 Protein Human 重組人 Interferon alpha 10 / IFNA10 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

MDA-MB-415(人癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 NRK(大鼠腎細(xì)胞)
小鼠腎臟上皮細(xì)胞(MREpiC)(5×105)

人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞cDNAHUVEC cDNA

大鼠胰腺外分泌腺細(xì)胞;AR42J

雜交瘤(B類);IB3C10H12A12G2H8F3 小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL

HUVEC-12, 人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞系 Human

TNFRSF11B Others Human 人 TNFRSF11B / OCIF 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)
小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶3(MMP3)ELISA試劑盒 ，英文名： MMP3 ELISA Kit

人天*氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)ELISA檢測試劑盒HumanAspartateaminotransferase,ASISAKit 96T/48T

大鼠纖溶酶原激活物抑制因子(PAI)免疫試劑盒 Rat plasminogen activator inhibitor ,PAI ELISA Kit

英文名稱RatangiotensinogenELISAKit大鼠血管緊張素原(aGT)規(guī)格：96T/48T

果菜抗壞血酸比色法定量檢測試劑盒20次

ELISAKitFA人*規(guī)格：48T/96T
兔子β血小板球蛋白/β血栓環(huán)蛋白(β-TG)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Human hemoglobin C (HbC) ELISA Kit 人血紅蛋白C(HbC)ELISA試劑盒

HumanInhibin,INHELISAKit 人抑制素(INH)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanfactorB,BFELISA試劑盒人B因子(BF)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織TRKB激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

HumanOncogeneProteinp190/bcr-ablELISAKitHumanOncogeneProteinp190/bcr-ablELISAKit人癌基因蛋白質(zhì)p190/bcr-ablELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
細(xì)胞凍存用DMSO（無菌）50ml實(shí)驗(yàn)方法人NOD樣受體(NLR)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人NK細(xì)胞ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人Na+/H+交換體3(NHE3)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人L選擇素(L-Selectin/CD62L)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝