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更新時間:2017-07-07 13:08:23瀏覽次數(shù):218次
聯(lián)系我時,請告知來自 儀表網(wǎng)硼酸鹽緩沖液(BBS,pH8.5-10)500ml使用說明書
DEAE-Dextran細胞轉(zhuǎn)染試劑盒200T使用說明書
*溶液(0.25%)100ml實驗方法實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細胞懸液每50~100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應呈綠色熒光;而正常的細胞經(jīng)JC-1 染色后應顯示紅色熒光。對于特定的細胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞:
(1)取 10~60 萬細胞,重懸于 0.5mL 細胞培養(yǎng)液中,細胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細胞。棄上清,注意盡量不要吸除細胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
*溶液(0.25%)100ml實驗方法注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標記時,盡可能在暗處進行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細胞,盡量在4℃下操作,以免影響細胞狀態(tài)。
(5)在細胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
RK1(大鼠腎細胞) 5×106cells/瓶×2
Saos-2人成骨肉瘤細胞 Saos-2 human osteosarcoma cells McCOY's 5A+15%FBS
GIF Others Human 人 Gastric intrinsic factor / GIF 人細胞裂解液 (陽性對照)
SF126細胞,人腦瘤細胞 表皮葡萄球菌 人腎上皮細胞總RNAHREpiC tRNA
正常小鼠Sertoli細胞;TM4
FaDu(人咽鱗癌細胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0299NCI-H460(人肺癌細胞)5×106cells/瓶×2 兔晶體上皮細胞永生系;N/N1003A(RLE)
人淋巴成纖維細胞RNAHLF miRNA5 μg
F13B Others Human 人 F13B / Coagulation factor XIII B chain 人細胞裂解液 (陽性對照)
U251 人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞
CL-0426RKO-E6(人結(jié)腸癌轉(zhuǎn)基因細胞)5×106cells/瓶×2
人星形膠質(zhì)細胞
人胚肺二倍體細胞;HL 人小腸粘膜上皮細胞*培養(yǎng)基 100mL
CDH2 Others Mouse 小鼠 N-Cadherin / CD325 / CDH2 人細胞裂解液 (陽性對照)
人臍帶間充質(zhì)干細胞RNAHUMSC miRNA5 μg
恒河猴腎細胞;LLC-MK2
RKO-E6細胞,人結(jié)腸癌轉(zhuǎn)基因細胞 人侵襲性脈絡膜黑色素瘤細胞,M619細胞 人耐VP16絨癌細胞株;JEG-3/VP16
HEC-1-B(人子宮內(nèi)膜腺癌細胞) 5×106cells/瓶×2
ALPL Others Human 人 ALPL / TNAP 人細胞裂解液 (陽性對照)
小鼠*S轉(zhuǎn)移酶α4(GSTα4)ELISA試劑盒 ,英文名: GSTα4 ELISA Kit
人銅藍蛋白(CP/CER)ELISA檢測試劑盒HumanCeruloplasmin,CP/CERELISAKit 96T/48T
大鼠水通道蛋白0(AQP-0)免疫試劑盒 Rat Aquaporin 0,AQP-0 ELISA Kit
英文名稱Ratpregnancyassociatedplasmaprotein-AELISAKit大鼠相關(guān)血漿蛋白A(PAPP-A)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
活化*13(FACTORXIIIa)活性熒光定量檢測試劑盒20次
ELISAKitANP人心鈉肽規(guī)格:48T/96T
兔子腸脂肪酸結(jié)合蛋白(iFABP)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human vascular endothelial cell growth factor B (VEGF-B) ELISA Kit 人血管內(nèi)皮細胞生長因子B(VEGF-B)ELISA試劑盒
Humantrueinsulin,TIELISAKit 人真胰島素(TI)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
HumanErythropoietinreceptor,EPORELISA試劑盒人紅細胞生成素受體(EPOR)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織RSK2激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次
Humanosteonectin,ONELISAKit人骨粘連蛋白(ON)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
*溶液(0.25%)100ml實驗方法人β干擾素(IFN-β/IFNB)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人β防御素1(HβD-1)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人β淀粉樣蛋白1-42(Aβ1-42)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人β淀粉樣蛋白1-40(Aβ1-40)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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