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更新時間:2017-07-07 13:05:58瀏覽次數(shù):215次
聯(lián)系我時,請告知來自 儀表網(wǎng)磷酸鈣細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒400T免費(fèi)代測實(shí)驗(yàn)操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細(xì)胞懸液每50~100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對于懸浮細(xì)胞:
(1)取 10~60 萬細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計(jì)檢測或流式細(xì)胞儀分析。
磷酸鈣細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒400T免費(fèi)代測注意事項(xiàng)
(1)本試劑只適用于實(shí)驗(yàn),不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標(biāo)記時,盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4℃下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
(5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進(jìn)行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
QSG-7701(人正常肝細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
原代上皮細(xì)胞特制無血清添加劑Many types of cells包裝:1ml
BST2 Others Human 人 TETHERIN / BST2 / CD317 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
HUVE-12/CRL2480細(xì)胞,人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 長臂猿淋巴瘤,MLA-144細(xì)胞 人真皮淋巴內(nèi)皮細(xì)胞總RNAHDLEC tRNA
雜交瘤(B類);IB3C10H12A12G2H8F3
EL4(小鼠淋巴瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0255A875(人黑色素瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 豚鼠胚胎細(xì)胞;104C1
CL-0162MS1(小鼠胰島內(nèi)皮細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
F7 Others Mouse 小鼠 Coagulation Factor VII / FVII / F7 CHO細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
人心肌細(xì)胞-裂解物HCM-a L
家豬皮膚細(xì)胞;SSC-S1 癌細(xì)胞,ZR-75-1細(xì)胞 NS1細(xì)胞,小鼠骨髓瘤細(xì)胞
腺病毒轉(zhuǎn)化的人胚腎細(xì)胞;AAV-293
HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/chicken/Egypt/2253-1/2006) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
PROC Others Human 人 PROC1 / Protein C / PROC 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
人皮膚鱗癌細(xì)胞;A-431 [A431]
小鼠皮層神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞(EGFP標(biāo)記)
3T6細(xì)胞,小鼠胚胎成纖維細(xì)胞 人前列腺癌細(xì)胞,gpc-1細(xì)胞 人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞RNAHRPEpiC miRNA5 μg
恒河猴腎細(xì)胞;RM-3
EPCAM Others Human 人 EpCAM 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
大鼠髓過氧化物酶(MPO)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人透明質(zhì)酸蛋白聚糖連結(jié)蛋白1(HAPLN1)免疫試劑盒 Human HAPLN1 ELISA Kit
*脫氫酶測試盒 紫外分光光度法 50管/48樣
Ratsolubleinterleukin-2receptor,IL-2sRαELISA試劑盒大鼠白介素2可溶性受體α鏈(IL-2sRα/CD25)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Humanisletamyloidpolypeptide,IAPPELISA試劑盒人胰島淀粉樣多肽(IAPP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanN-acetyl-β-D-glucosaminidase,NAGELISAKit人N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
兔子促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human angiotensinogen (aGT) ELISA Kit 人血管緊張素原(aGT)ELISA試劑盒
Humananti-parotidductantibodyELISAKit 人抗腮腺管抗體(anti-parotidductAb)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
Humanepstein-barrvirusIgA,EBvIgAELISA試劑盒人EB病毒IgA(EBvIgA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織ROCK-I激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次
Humanovariancancermarker-CA125ELISAKit人卵巢癌標(biāo)志物CA125ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
磷酸鈣細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒400T免費(fèi)代測人吖啶橙(AO)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人ω干擾素(IFN-ω)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人γ肽(Pγ)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人γ谷酰轉(zhuǎn)移酶(GGT)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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