當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>細(xì)胞培養(yǎng)>> 轉(zhuǎn)染試劑0.5ml使用說明書
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更新時間:2017-07-07 13:05:43瀏覽次數(shù):308次
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轉(zhuǎn)染試劑0.5ml使用說明書實(shí)驗(yàn)操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細(xì)胞懸液每50~100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對于懸浮細(xì)胞:
(1)取 10~60 萬細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計(jì)檢測或流式細(xì)胞儀分析。
轉(zhuǎn)染試劑0.5ml使用說明書注意事項(xiàng)
(1)本試劑只適用于實(shí)驗(yàn),不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標(biāo)記時,盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4℃下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
(5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進(jìn)行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
QGY-7703(人肝癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
原代心肌細(xì)胞特制無血清添加劑Many types of cells包裝:1ml
HGF Others Mouse 小鼠 HGF / Hepatocyte Growth Factor 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
HUVEC(原代)細(xì)胞,人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞 HPVl6 E6、E7和ras基因共轉(zhuǎn)化的C57BL/C(H-2b)小鼠肺上皮細(xì)胞,TC-1細(xì)胞 人雪旺細(xì)胞總RNAHSC tRNA
小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞;PUMC-mips-B2
Eca-109(人食管癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0246YAC-1(小鼠淋巴瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 中國倉鼠肺細(xì)胞;V79
T-109B彈性蛋白酶(含100mL酶解緩沖液)10mL
F7 Others Mouse 小鼠 Coagulation Factor VII / FVII / F7 CHO細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
成纖維細(xì)胞生長添加物(不含動物成分)FGS-acf
白牦牛皮膚細(xì)胞;Yak-2 橫紋肌瘤細(xì)胞,A673細(xì)胞 NAMALWA(Burkitt's 淋巴瘤細(xì)胞)
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;Mao
IL11RA Others Human 人 IL11RA / IL11Rα 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
ENTPD3 Others Human 人 ENTPD3 / NTPDase3 / CD39L3 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
人皮膚黑色素瘤細(xì)胞;SK-MEL-1
CM-H118人腦靜脈血管平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
T24, 人膀胱癌細(xì)胞 胚癌細(xì)胞,Pcc4細(xì)胞 NCI-H1299(人肺癌細(xì)胞)
綠色熒光蛋白標(biāo)記小鼠子細(xì)胞;U14-GFP
FGFR3 Others Mouse 小鼠 FGFR3 / CD333 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
大鼠髓過氧化物酶特異性抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體IgG(MPO-ANCA IgG)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白2(HABP2)免疫試劑盒 Human HABP2 ELISA Kit
*含量測試盒 可見分光光度法 50管/48樣
Ratsolubleinterleukin-1receptorⅡ,IL-1sRⅡELISA試劑盒大鼠白介素1可溶性受體Ⅱ(IL-1sRⅡ)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanIschemiaModifiedAlbumin,IMAELISA試劑盒人缺血修飾白蛋白(IMA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanN-Acetyl-Ser-Asp-Lys-Pro,AcSDKPELISAKit人N-乙?;?/span>-絲氨酰-天門冬酰-賴氨酰-*(AcSDKP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
兔子催乳素(PRL)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human angiotensin II receptor 1 (AT II R1) ELISA Kit 人血管緊張素Ⅱ受體1抗體(ATⅡR1)ELISA試劑盒
Humananti-chorionicgonadotropin-antibody,AhCGAbELISAKit 人抗人絨毛膜*抗體(AhCGAb)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
Humanepithelialspecificantigen,ESAELISA試劑盒人上皮特異性抗原(ESA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織ROCK-II激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次
Humanoxidizedlowdensitylipoproteinantibody,OLAbELISAKit人氧化低密度脂蛋白抗體(OLAb)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
轉(zhuǎn)染試劑0.5ml使用說明書人癌基因蛋白質(zhì)p190/bcr-ablELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人阿米巴(Amebiasis)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人阿立新A(OrexinA)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人阿拉伯半乳糖蛋白(AGPs)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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