1X PBS緩沖液 (pH7.4)500ml實(shí)驗(yàn)方法使用注意事項(xiàng)
1．微量試劑取用前請離心集液。
2．7-AAD避光保存及使用。
3．7-AAD為潛在致癌物，操作時(shí)請采取防護(hù)措施，穿*、戴手套等。
4．本試劑盒適用于檢測活細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測時(shí)，細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105，，不*用于檢測組織樣本。
1X PBS緩沖液 (pH7.4)500ml實(shí)驗(yàn)方法操作方法
1．懸浮細(xì)胞離心（2000rpm離心5min）收集；貼壁細(xì)胞用*消化收集用PBS洗滌細(xì)胞二次（2000rpm離心5min）收集1~5×105細(xì)胞；
2．加入5μL 7-AAD染液，混勻；室溫、避光、反應(yīng)5～15min；
3．加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細(xì)胞；
4．請?jiān)?/span>1 hour內(nèi)，進(jìn)行下述熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的觀察和檢測。
A．熒光顯微鏡觀察
1．滴一滴上述染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上，并用蓋玻片蓋上細(xì)胞；
2．對于貼壁細(xì)胞來說，也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；
（1）將細(xì)胞于蓋玻片上生長，用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并設(shè)立陰性對照組；
（2）用PBS洗滌細(xì)胞兩次；
（3）在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液，混勻；
（4）將上述溶液滴加于蓋玻片表面，使長有細(xì)胞的蓋玻片表面均勻覆蓋；
（5）避光、室溫反應(yīng)5 min。
3．將蓋玻片倒置于載玻片上，于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長546nm，發(fā)射波長647 nm，7-AAD熒光信號呈紅色。
B．流式細(xì)胞儀分析
用流式細(xì)胞儀檢測，激發(fā)波長Ex=546 nm; 發(fā)射波長Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測。
1X PBS緩沖液 (pH7.4)500ml實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)步驟
貼壁細(xì)胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細(xì)胞。在消化時(shí)可加2％的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時(shí)，注意必須*清除EDTA：在標(biāo)記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌，清除EDTA，以免殘余的EDTA與Ca2＋螯合，影響Annexin V的結(jié)合。
（1）用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer；
（2）細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集：離心5分鐘；貼壁細(xì)胞：用不含EDTA的*消化收集后（注：*消化時(shí)間不宜過長，否則會影響細(xì)胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合），于室溫2000rpm離心5～10分鐘，收集細(xì)胞；
（3）細(xì)胞洗滌：用預(yù)冷1×PBS（4℃）重懸細(xì)胞一次，2000rpm離心5～10分鐘，洗滌細(xì)胞；
（4）加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞；
（5）Annexin V-FITC標(biāo)記：加入5μL的Annexin V-FITC混勻后，避光，室溫孵育15分鐘；
（6）PI標(biāo)記：上機(jī)前5分鐘再加入5μL的PI染色。
（7）上機(jī)前，補(bǔ)加200μL的1×Binding Buffer。
Psi2 DAP(小鼠胚胎成纖維細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

表皮角化細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)

CEACAM1 Others Rat 大鼠 CEACAM1 / CD66a 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

VE細(xì)胞，人血管內(nèi)皮細(xì)胞 小鼠骨髓瘤細(xì)胞,NS-1細(xì)胞 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞cDNAHUVEC cDNA

小鼠胰腺癌細(xì)胞(B類);Pan02

DU 145(人前列腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0230Tca-8113(人舌鱗癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 敘利亞倉鼠細(xì)胞系;Syrian Hamster AV12
恒河猴胚腎細(xì)胞;FRhK-4 [FRhK4]

F9 Others Mouse 小鼠 Coagulation Factor IX / FIX / F9 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

HL-60 人原髓細(xì)胞白血病細(xì)胞

COLO 320DM 人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞 COLO 320DM human colorectal adenocarcinoma cells RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS

PGF Protein Mouse 重組小鼠 PIGF / PLGF 蛋白

大鼠周神經(jīng)成纖維細(xì)胞(RPNF)(5×105) HEC-1A, 人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系 Human
人腸平滑肌細(xì)胞(HISMC)( 5×105 )

人皮膚成纖維樣細(xì)胞;HSF2

CL-0366IAR20(大鼠肝細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

人肺癌細(xì)胞;A-427 [A427] 大鼠破骨細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL

EL4.IL-2 小鼠淋巴瘤細(xì)胞

MET Others Mouse 小鼠 c-MET / HGFR 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
大鼠髓磷脂堿性蛋白(MBP)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

人突觸回蛋白2(SYNJ2)免疫試劑盒 Human Synaptojanin 2,SYNJ2 ELISA Kit

海藻糖酶測試盒 可見分光光度法 25管/24樣

Ratsolubleinterleukin-1receptorⅠ,IL-1sRⅠELISA試劑盒大鼠白介素1可溶性受體Ⅰ(IL-1sRⅠ)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

HumanIPO-38ELISA試劑盒人IPO-38蛋白(IPO38)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

HumanNa+/H+exchanger3,NHE3ELISAKit人Na+/H+交換體3(NHE3)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
兔子*酯轉(zhuǎn)移蛋白(CETP)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Human angiotensin I receptor antibody (ANG- I R) ELISA Kit 人血管緊張素Ⅰ受體抗體(ANG-ⅠR)ELISA試劑盒

Humananti-braintissueantibody,ABAbELISAKit 人抗腦組織抗體(ABAb)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanEpithelialmembraneantigen,EMAELISA試劑盒人上皮膜抗原(EMA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織PYK2激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

Humanoxytocin，OISAKit人催產(chǎn)素(OT)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
1X PBS緩沖液 (pH7.4)500ml實(shí)驗(yàn)方法人白喉抗體(DiphtheriaAb)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人白C抗原（DR15）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人靶向核糖核酸酶(TR)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人八聚體轉(zhuǎn)錄因子(OTF2B)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝