組織活性氧（ROS）檢測(cè)試劑盒100T免費(fèi)代測(cè)使用注意事項(xiàng)
1．微量試劑取用前請(qǐng)離心集液。
2．7-AAD避光保存及使用。
3．7-AAD為潛在致癌物，操作時(shí)請(qǐng)采取防護(hù)措施，穿*、戴手套等。
4．本試劑盒適用于檢測(cè)活細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)，細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105，，不*用于檢測(cè)組織樣本。
組織活性氧（ROS）檢測(cè)試劑盒100T免費(fèi)代測(cè)操作方法
1．懸浮細(xì)胞離心（2000rpm離心5min）收集；貼壁細(xì)胞用*消化收集用PBS洗滌細(xì)胞二次（2000rpm離心5min）收集1~5×105細(xì)胞；
2．加入5μL 7-AAD染液，混勻；室溫、避光、反應(yīng)5～15min；
3．加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細(xì)胞；
4．請(qǐng)?jiān)?/span>1 hour內(nèi)，進(jìn)行下述熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的觀察和檢測(cè)。
A．熒光顯微鏡觀察
1．滴一滴上述染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上，并用蓋玻片蓋上細(xì)胞；
2．對(duì)于貼壁細(xì)胞來(lái)說(shuō)，也可直接用蓋玻片來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；
（1）將細(xì)胞于蓋玻片上生長(zhǎng)，用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并設(shè)立陰性對(duì)照組；
（2）用PBS洗滌細(xì)胞兩次；
（3）在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液，混勻；
（4）將上述溶液滴加于蓋玻片表面，使長(zhǎng)有細(xì)胞的蓋玻片表面均勻覆蓋；
（5）避光、室溫反應(yīng)5 min。
3．將蓋玻片倒置于載玻片上，于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長(zhǎng)546nm，發(fā)射波長(zhǎng)647 nm，7-AAD熒光信號(hào)呈紅色。
B．流式細(xì)胞儀分析
用流式細(xì)胞儀檢測(cè)，激發(fā)波長(zhǎng)Ex=546 nm; 發(fā)射波長(zhǎng)Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測(cè)。
組織活性氧（ROS）檢測(cè)試劑盒100T免費(fèi)代測(cè)實(shí)驗(yàn)步驟
貼壁細(xì)胞需用0.25%的*消化。注意過(guò)度消化可損傷細(xì)胞。在消化時(shí)可加2％的BSA可防止消化過(guò)度。如果用含EDTA的*消化時(shí)，注意必須*清除EDTA：在標(biāo)記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌，清除EDTA，以免殘余的EDTA與Ca2＋螯合，影響Annexin V的結(jié)合。
（1）用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer；
（2）細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集：離心5分鐘；貼壁細(xì)胞：用不含EDTA的*消化收集后（注：*消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合），于室溫2000rpm離心5～10分鐘，收集細(xì)胞；
（3）細(xì)胞洗滌：用預(yù)冷1×PBS（4℃）重懸細(xì)胞一次，2000rpm離心5～10分鐘，洗滌細(xì)胞；
（4）加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞；
（5）Annexin V-FITC標(biāo)記：加入5μL的Annexin V-FITC混勻后，避光，室溫孵育15分鐘；
（6）PI標(biāo)記：上機(jī)前5分鐘再加入5μL的PI染色。
（7）上機(jī)前，補(bǔ)加200μL的1×Binding Buffer。
NCI-H23(人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)

THBD Others Rat 大鼠 Thrombomodulin / THBD 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

Raji細(xì)胞，人Burkitt`s淋巴瘤細(xì)胞 C57小鼠黑色素瘤瘤株,ME細(xì)胞 人腎近曲小管上皮細(xì)胞裂解物HRPTEpiCL

犬腎細(xì)胞;MDCK(NBL-2)

CCD-1095Sk(人浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌旁皮膚細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0078EL4(小鼠淋巴瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 615小鼠網(wǎng)織細(xì)胞性白血病瘤株;L615
人神經(jīng)元RNAHN miRNA5 μg

FCER1A Others Human 人 FcERI / FCER1A 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

人冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL

3T3NIH細(xì)胞，小鼠成纖維細(xì)胞 HUVEC(人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞) 小鼠垂體瘤細(xì)胞;GT1-1

CSF1 Protein Mouse 重組小鼠 M-CSF / CSF-1 蛋白 (His 標(biāo)簽)

Tca-8113(人舌鱗癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 野生型人c-kit受體細(xì)胞株;A7d
PPARG Others Human 人 PPARG / Nr1c3 / PPARgamma 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

人胚胎，皮膚，肌肉;M-22

興國(guó)鯉尾鰭細(xì)胞;XGL

NAMALWA細(xì)胞，Burkitt's 淋巴瘤細(xì)胞 細(xì)胞,KB-C1.5細(xì)胞 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMY0903

615小鼠肺癌瘤株;HP615

TNFRSF10B Others Human 人 TNFRSF10B / TRAILR2 / CD262 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
大鼠糖皮質(zhì)激素受體β(GR-β)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

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