活性氮檢測(cè)試劑盒RNS200T使用說(shuō)明書(shū)使用注意事項(xiàng)
1．微量試劑取用前請(qǐng)離心集液。
2．7-AAD避光保存及使用。
3．7-AAD為潛在致癌物，操作時(shí)請(qǐng)采取防護(hù)措施，穿*、戴手套等。
4．本試劑盒適用于檢測(cè)活細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)，細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105，，不*用于檢測(cè)組織樣本。
活性氮檢測(cè)試劑盒RNS200T使用說(shuō)明書(shū)操作方法
1．懸浮細(xì)胞離心（2000rpm離心5min）收集；貼壁細(xì)胞用*消化收集用PBS洗滌細(xì)胞二次（2000rpm離心5min）收集1~5×105細(xì)胞；
2．加入5μL 7-AAD染液，混勻；室溫、避光、反應(yīng)5～15min；
3．加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細(xì)胞；
4．請(qǐng)?jiān)?/span>1 hour內(nèi)，進(jìn)行下述熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的觀察和檢測(cè)。
A．熒光顯微鏡觀察
1．滴一滴上述染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上，并用蓋玻片蓋上細(xì)胞；
2．對(duì)于貼壁細(xì)胞來(lái)說(shuō)，也可直接用蓋玻片來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；
（1）將細(xì)胞于蓋玻片上生長(zhǎng)，用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并設(shè)立陰性對(duì)照組；
（2）用PBS洗滌細(xì)胞兩次；
（3）在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液，混勻；
（4）將上述溶液滴加于蓋玻片表面，使長(zhǎng)有細(xì)胞的蓋玻片表面均勻覆蓋；
（5）避光、室溫反應(yīng)5 min。
3．將蓋玻片倒置于載玻片上，于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長(zhǎng)546nm，發(fā)射波長(zhǎng)647 nm，7-AAD熒光信號(hào)呈紅色。
B．流式細(xì)胞儀分析
用流式細(xì)胞儀檢測(cè)，激發(fā)波長(zhǎng)Ex=546 nm; 發(fā)射波長(zhǎng)Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測(cè)。
活性氮檢測(cè)試劑盒RNS200T使用說(shuō)明書(shū)實(shí)驗(yàn)步驟
貼壁細(xì)胞需用0.25%的*消化。注意過(guò)度消化可損傷細(xì)胞。在消化時(shí)可加2％的BSA可防止消化過(guò)度。如果用含EDTA的*消化時(shí)，注意必須*清除EDTA：在標(biāo)記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌，清除EDTA，以免殘余的EDTA與Ca2＋螯合，影響Annexin V的結(jié)合。
（1）用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer；
（2）細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集：離心5分鐘；貼壁細(xì)胞：用不含EDTA的*消化收集后（注：*消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合），于室溫2000rpm離心5～10分鐘，收集細(xì)胞；
（3）細(xì)胞洗滌：用預(yù)冷1×PBS（4℃）重懸細(xì)胞一次，2000rpm離心5～10分鐘，洗滌細(xì)胞；
（4）加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞；
（5）Annexin V-FITC標(biāo)記：加入5μL的Annexin V-FITC混勻后，避光，室溫孵育15分鐘；
（6）PI標(biāo)記：上機(jī)前5分鐘再加入5μL的PI染色。
（7）上機(jī)前，補(bǔ)加200μL的1×Binding Buffer。
NCI-H226(人肺鱗癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

皮下脂肪細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)

COL4A3 Others Rat 大鼠 COL4A3 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

Hut-102細(xì)胞，人T淋巴瘤細(xì)胞系 Walker氏癌肉瘤256瘤株,W256細(xì)胞 人小氣道上皮細(xì)胞裂解物HSAEpiCL

狗腎惡性組織細(xì)胞增生癥細(xì)胞;DH82

Caov-3(人乳突狀卵巢腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0070CRFK(貓腎細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 615小鼠滑膜肉瘤瘤株;ZM755
人肺泡上皮細(xì)胞RNAHPAEpiC miRNA5 μg

FCER1A Others Mouse 小鼠 FcERI / FCER1A 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL

HSC-T6細(xì)胞，鼠肝星形細(xì)胞 SW620(結(jié)腸癌細(xì)胞) 人前列腺癌低轉(zhuǎn)移細(xì)胞株;PC-3M-2B4

CSF1 Protein Mouse 重組小鼠 M-CSF / CSF-1 蛋白

SW620(人結(jié)腸癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 甲型流感 H7N9 (A/Shanghai/4664T/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
CNPY4 Others Human 人 CNPY4 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

人胚胎，皮膚，肌肉;M-20

SD大鼠骨髓間質(zhì)干細(xì)胞 SD rat bone marrow mesenchymal stem cells

HME4細(xì)胞，人黑色素瘤細(xì)胞 青春雙歧桿菌 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMY0905

UACC-812(人導(dǎo)管瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

HuH-7(人肝癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 GH3, 大鼠垂體生長(zhǎng)激素腺瘤 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMY0928
大鼠糖皮質(zhì)類固醇受體(GR)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

人唾液過(guò)氧化物酶(SP)免疫試劑盒 Human Saliva Peroxidase,SP ELISA Kit

蔗糖酶測(cè)試盒 可見(jiàn)分光光度法 50管/48樣

Ratsexhormone-bindingglobulin,SHBGELISA試劑盒大鼠性激素結(jié)合球蛋白(SHBG)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

HumanInterleukin3,IL-3ELISA試劑盒人白介素3(IL-3)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

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兔子膠原酶II(Collagenase II)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Human thymidylate synthase (TS) ELISA Kit 人胸苷酸合成酶(TS)ELISA試劑盒

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組織PKCβ2激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20次

Humanpaxillin,PaxELISAKit人樁蛋白(Pax)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
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