當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>細(xì)胞氧化應(yīng)激>> 過氧化物酶檢測試劑盒-比色法100T免費代測
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更新時間:2017-07-07 11:59:25瀏覽次數(shù):118次
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過氧化物酶檢測試劑盒-比色法100T免費代測實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細(xì)胞懸液每50~100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對于懸浮細(xì)胞:
(1)取 10~60 萬細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細(xì)胞儀分析。
過氧化物酶檢測試劑盒-比色法100T免費代測注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標(biāo)記時,盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4℃下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
(5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進(jìn)行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
Chang liver (CCL13) (人張氏肝細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
人海馬趾神經(jīng)細(xì)胞裂解物HN-h L
CLEC14A Others Rat 大鼠 CLEC14A / EGFR-5 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
Caov-3細(xì)胞,人卵巢癌細(xì)胞 大鼠胰島素細(xì)胞,INS-1細(xì)胞 神經(jīng)元細(xì)胞Many types of cells包裝:5 ×105次方(1ml)
CL-0092HBZY-1(大鼠腎小球系膜細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
SkMC Pellet 人骨骼肌細(xì)胞團塊 > 1 mio.cells 人生發(fā)基質(zhì)細(xì)胞cDNAHHGMC cDNA
平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基SMCM-sf
GADD45A Others Human 人 GADD45A / DDIT-1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
*;HEL
P3/NSI/1-Ag4-1[NS-1]細(xì)胞,骨髓瘤細(xì)胞 人結(jié)腸癌細(xì)胞,SW620細(xì)胞 CM-H053人子宮平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
大鼠腎小球系膜細(xì)胞;HBZY-1
NTRK1 Others Human 人 TrkA / NTRK1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
SELP Others Rat 大鼠 SELP / selectin P / P-selectin 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
人外根殼細(xì)胞cDNAHHORSC cDNA
小鼠腹水瘤細(xì)胞;S-180
小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞;PUMC-mips-B4 I型膠原酶(含10mL酶解緩沖液) 1mL
Raji,人Burkitt's淋巴瘤細(xì)胞 Human
FAS Others Human 人 CD95 / Fas / TNFRSF6 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
小鼠醌NADH脫氫酶1(NQO1)ELISA試劑盒 ,英文名: NQO1 ELISA Kit
人胃粘液素(GM)ELISA檢測試劑盒HumanGastricMucin,GMELISAKit 96T/48T
大鼠血纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)免疫試劑盒 Rat Fibrinogen Degradation Product,FDP ELISA Kit
英文名稱RatTumornecrosisfactorsolublereceptorⅡELISAKIT大鼠腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅱ(TNFsRⅡ)規(guī)格:96T/48T
甘油(glycerol)含量酶連續(xù)循環(huán)反應(yīng)比色法定量檢測試劑盒20次
ELISAKitPGR人孕同受體規(guī)格:48T/96T
豚鼠促卵泡素(FSH)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human cytokeratin fragment 21-1 (CYFRA21-1) ELISA Kit 人細(xì)胞角蛋白21-1片段(CYFRA21-1)ELISA試劑盒
humananti-nucleosomeantibodyIgG,AnuA-IgGELISAKit 人抗核小體抗體IgG(AnuA-IgG)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
HumanCyclin-D3ELISA試劑盒人細(xì)胞周期素D3(Cyclin-D3)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織FYNT激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次
HumanpregnancyassociatedplasmaproteinA,PAPP-AELISAKit人相關(guān)血漿蛋白A(PAPP-A)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
過氧化物酶檢測試劑盒-比色法100T免費代測人堿性成纖維細(xì)胞生長因子4(bFGF-4)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人間隙連接蛋白(Cx)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人間變性淋巴瘤激酶(ALK)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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