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乳酸脫氫酶(LDH)檢測(cè)試劑盒50T實(shí)驗(yàn)方法

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乳酸脫氫酶(LDH)檢測(cè)試劑盒50T實(shí)驗(yàn)方法公司供應(yīng)的細(xì)胞生物學(xué)試劑品種齊全,質(zhì)量保證,*,歡迎廣大科研用戶(hù)選購(gòu)!

乳酸脫氫酶(LDH)檢測(cè)試劑盒50T實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類(lèi)推;對(duì)于細(xì)胞懸液每50100 萬(wàn)細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 200×),按照每50μL JC-1200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽(yáng)性對(duì)照的設(shè)置:
    把試劑盒中提供的CCCP10mM )*按照1 1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測(cè)。對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會(huì)*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對(duì)于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時(shí)間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對(duì)于懸浮細(xì)胞:
1)取 1060 萬(wàn)細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 孵育20 分鐘。
3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液()加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(),并放置于冰浴。
437孵育結(jié)束后,600g 4 離心3 4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
5)用JC-1 染色緩沖液()洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細(xì)胞,600g 4 離心34 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細(xì)胞,600g 4 離心 34 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
6)再用適量 JC-1 染色緩沖液()重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計(jì)檢測(cè)或流式細(xì)胞儀分析。
乳酸脫氫酶(LDH)檢測(cè)試劑盒50T實(shí)驗(yàn)方法注意事項(xiàng)
1)本試劑只適用于實(shí)驗(yàn),不適用于臨床檢測(cè);
2PIpropidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過(guò)皮膚吸收,對(duì)眼睛有刺激作用,使用時(shí)需戴手套;
3Annexin V-FITCPI是光敏物質(zhì),在操作時(shí)請(qǐng)注意避光。在處理和標(biāo)記時(shí),盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
4)整個(gè)操作過(guò)程動(dòng)作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請(qǐng)盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
6)為防止熒光衰變,宜在1小時(shí)內(nèi)進(jìn)行流式檢測(cè)。
7PI染色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)有可能造成檢測(cè)的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
B16-F1(小鼠黑色素瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

人間充質(zhì)干細(xì)胞-脂肪裂解物HMSC-ad L

CD58 Others Human LFA-3 / CD58 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

ER-30細(xì)胞,人癌細(xì)胞 大鼠腺癌細(xì)胞系,MADB106細(xì)胞 淋巴成纖維細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)

CL-0180P388D1(小鼠淋巴樣瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

NHEM.f M2 Pellet 正常人表皮黑素細(xì)胞團(tuán)塊(少年者),培養(yǎng)在M2培養(yǎng)液中 > 1 mio.cells 人氣管上皮細(xì)胞裂解物HTEpiCL
人肺細(xì)胞;HLF-a

GFRA1 Others Canine GFRA1 / GFR alpha-1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

恒河猴腎細(xì)胞;MMK3

Ls-174-T細(xì)胞,人結(jié)腸癌細(xì)胞 人黑色素瘤細(xì)胞,SK23細(xì)胞 人細(xì)胞;Hela

HCCC-9810(人肝內(nèi)膽管癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

APP Others Human APP / Protease nexin-II 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
DDR2 Others Cynomolgus 食蟹猴 DDR2 Kinase 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

人脈絡(luò)叢內(nèi)皮細(xì)胞HCPEC

貓腎細(xì)胞;F81

LTPEP-a-2細(xì)胞,人肺腺癌細(xì)胞 非洲綠猴腎細(xì)胞,VERO C1008 (E6)細(xì)胞 CM-M042小鼠直腸平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

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NHEK-c adult 正常人表皮角質(zhì)形成細(xì)胞(NHEK)成年單一捐獻(xiàn)者 500,000cells 原代骨細(xì)胞特制無(wú)血清添加劑Many types of cells包裝:1ml
大鼠纖連蛋白(FN)ELISA試劑盒 ,英文名: FN ELISA Kit

人戊型肝炎病毒IgM(HEV-IgM)ELISA檢測(cè)試劑盒humanhepatitisEvirusIgM,HEV-IgMELISAKit 96T/48T

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HumancutaneousTcell-attractingchemokine,CTACKELISA試劑盒人皮膚T細(xì)胞虜獲趨化因子(CTACK/CCL27)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

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