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更新時間:2017-07-05 10:59:41瀏覽次數(shù):204次
聯(lián)系我時,請告知來自 儀表網(wǎng)酵母核蛋白提取試劑盒50T實驗方法儲存條件:蛋白提取液2-8℃保存;蛋白酶抑制劑-20℃保存。
有效期:一年。
產(chǎn)品簡介:
酵母核蛋白提取試劑盒提供全套試劑,適用于從各種酵母中提取核蛋白。提取過程簡單方便。制備的核蛋白純度高,保持天然活性,絕少交叉污染。提取的蛋白可用于WesternBlotting、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gelshift凝膠阻滯實驗、免疫共沉淀、酶活性測定等蛋白研究。
酵母核蛋白提取試劑盒50T實驗方法實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細胞懸液每50~100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應呈綠色熒光;而正常的細胞經(jīng)JC-1 染色后應顯示紅色熒光。對于特定的細胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞:
(1)取 10~60 萬細胞,重懸于 0.5mL 細胞培養(yǎng)液中,細胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細胞。棄上清,注意盡量不要吸除細胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
酵母核蛋白提取試劑盒50T實驗方法注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標記時,盡可能在暗處進行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細胞,盡量在4℃下操作,以免影響細胞狀態(tài)。
(5)在細胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
艾納香Blumea balsamifera Tamarixetin 檉柳黃素 603-61-2 C16H12O7 ≥97%
糖化酶Sccchcrifyingqnzymq250g
*內(nèi)酯甲 Wilforlide A 84104-71-2 20mg HPLC≥98% 用于含量測定
對照品美他環(huán)素0498-9901含量測定
巴利森苷B Parishin B 62499-28-9 20mg HPLC≥98% 巴利森苷B62499-28-9用于含量測...
25507-04-4 鹽酸*棕櫚酯標準品 500mg
洋薊 Cynara scolymus L. 洋薊素 1884-23-7 C25H24O12 ≥98% 人胰島素(I0 10000
*相關物質(zhì)E標準品10mg
Cholecalciferol (Vitamin D3)維生素D3標準品67-97-030mg×5ampules
酪醇 501-94-0 HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
黃芪皂苷Ⅲ AstragalosideⅢ 分 子 量:784.9700 編號:84687-42-3 分子式:C41H68O14 別 名:黃芪皂甙Ⅲ 【性狀】 本品為無色針狀結(jié)晶
一文錢Stephania delavayi Stigmasta-5,8-dien-3-ol 豆甾-5,8-二烯-3-醇 570-72-9 C29H48O 二水合言酸鈉洛同(5974
中藥對照藥材升麻121182-200502TLC法鑒別
Kaempferitrin 苷 純度:≥98%
矮楊梅Myrica nana Myricanol triacetate 三乙酸楊梅醇酯 34509-52-9 C27H32O8 ≥95%
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