內(nèi)質(zhì)網(wǎng)提取試劑盒100T使用說(shuō)明書注意事項(xiàng)
（1）本試劑只適用于實(shí)驗(yàn)，不適用于臨床檢測(cè)；
（2）PI（propidium iodide，碘化丙錠）有毒性，能通過(guò)皮膚吸收，對(duì)眼睛有刺激作用，使用時(shí)需戴手套；
（3）Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì)，在操作時(shí)請(qǐng)注意避光。在處理和標(biāo)記時(shí)，盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段，用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后，在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察；
（4）整個(gè)操作過(guò)程動(dòng)作要盡量輕柔，勿用力吹打細(xì)胞，盡量在4℃下操作，以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
（5）在細(xì)胞洗滌的后一步，請(qǐng)盡量將上清棄凈，以免PBS殘留，有可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
（6）為防止熒光衰變，宜在1小時(shí)內(nèi)進(jìn)行流式檢測(cè)。
（7）PI染色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)有可能造成檢測(cè)的凋亡率偏高，建議首*行Annexin V-FITC染色，短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
內(nèi)質(zhì)網(wǎng)提取試劑盒100T使用說(shuō)明書儲(chǔ)存條件：2-8℃保存。

有效期：一年。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)存在于除哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞外的各種真核細(xì)胞中。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)為由生物膜構(gòu)成的互相通連的片層隙狀或小管狀系統(tǒng)，膜片間的隙狀空間稱為池，通常與細(xì)胞外隙和細(xì)胞漿基質(zhì)之間不直接相通。這種細(xì)胞內(nèi)的膜性管道系統(tǒng)一方面構(gòu)成細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)運(yùn)輸?shù)耐罚矸矫鏋榧?xì)胞內(nèi)各種各樣的酶反應(yīng)提供廣闊的反應(yīng)面積。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的功能與蛋白質(zhì)的合成、糖類和脂類的合成、解毒、同化作用有關(guān)，并且還具有運(yùn)輸?shù)鞍踪|(zhì)的功能。

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)提取試劑盒100T使用說(shuō)明書實(shí)驗(yàn)操作步驟：
1、液的配制：
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ，其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推；對(duì)于細(xì)胞懸液每50～100 萬(wàn)細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 （200×），按照每50μL JC-1（200×）加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液（5 ×），混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽(yáng)性對(duì)照的設(shè)置：
    把試劑盒中提供的CCCP（10mM ）*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中，稀釋至10uM ，處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ，進(jìn)行線粒體膜電位的檢測(cè)。對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞，通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會(huì)*喪失，JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光；而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對(duì)于特定的細(xì)胞，CCCP 的作用濃度和作用時(shí)間可能有所不同，需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對(duì)于懸浮細(xì)胞：
（1）取 10～60 萬(wàn)細(xì)胞，重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中，細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
（2）加入 0.5mL JC-1 染色工作液，顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
（3）在孵育期間，按照每 1mL JC-1 染色緩沖液（5×）加入 4mL 蒸餾水的比例，配制適量的JC-1 染色緩沖液（1×），并放置于冰浴。
（4）37℃孵育結(jié)束后，600g 4 ℃離心3 ～4 分鐘，沉淀細(xì)胞。棄上清，注意盡量不要吸除細(xì)胞。
（5）用JC-1 染色緩沖液（1×）洗滌 2 次：加入 1mL JC-1 染色緩沖液（1×）重懸細(xì)胞，600g 4 ℃離心3～4 分鐘，沉淀細(xì)胞，棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液（1×）重懸細(xì)胞，600g 4 ℃離心 3～4 分鐘，沉淀細(xì)胞，棄上清。
（6）再用適量 JC-1 染色緩沖液（1×）重懸后，用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察，也可以用熒光分光光度計(jì)檢測(cè)或流式細(xì)胞儀分析。
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