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高爾基體提取試劑盒100T實(shí)驗(yàn)方法

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高爾基體提取試劑盒100T實(shí)驗(yàn)方法儲(chǔ)存條件:2-8℃保存。

有效期:一年。

產(chǎn)品簡介:

高爾基體(Golgiapparatus,Golgibodies)是由許多扁平的囊泡構(gòu)成的以分泌為主要功能的細(xì)胞器。又稱高爾基器或高爾基復(fù)合體;高爾基體是由數(shù)個(gè)扁平囊泡堆在一起形成的高度有極性的細(xì)胞器。常分布于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與細(xì)胞膜之間,呈弓形或半球形,凸出的一面對(duì)著內(nèi)質(zhì)網(wǎng)稱為形成面(formingface)或順面(cisface)。凹進(jìn)的一面對(duì)著質(zhì)膜稱為成熟面(matureface)或反面(transface)。

高爾基體提取試劑盒100T實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對(duì)于細(xì)胞懸液每50100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 200×),按照每50μL JC-1200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對(duì)照的設(shè)置:
    把試劑盒中提供的CCCP10mM )*按照1 1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測。對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會(huì)*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對(duì)于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時(shí)間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對(duì)于懸浮細(xì)胞:
1)取 1060 萬細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 孵育20 分鐘。
3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液()加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(),并放置于冰浴。
437孵育結(jié)束后,600g 4 離心3 4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
5)用JC-1 染色緩沖液()洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細(xì)胞,600g 4 離心34 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細(xì)胞,600g 4 離心 34 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
6)再用適量 JC-1 染色緩沖液()重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計(jì)檢測或流式細(xì)胞儀分析。
高爾基體提取試劑盒100T實(shí)驗(yàn)方法注意事項(xiàng)
1)本試劑只適用于實(shí)驗(yàn),不適用于臨床檢測;
2PIpropidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對(duì)眼睛有刺激作用,使用時(shí)需戴手套;
3Annexin V-FITCPI是光敏物質(zhì),在操作時(shí)請(qǐng)注意避光。在處理和標(biāo)記時(shí),盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
4)整個(gè)操作過程動(dòng)作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請(qǐng)盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
6)為防止熒光衰變,宜在1小時(shí)內(nèi)進(jìn)行流式檢測。
7PI染色時(shí)間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
大葉藤黃Garcinia xanthochymus 1,4,6-Trixy7noxy-5-metxoxy-7-prenylxanthone 1,4,6-三羥基-5-甲氧基-7-異戊二烯基呫噸酮 160623-47-2 C19H18O6 95%

丹參速內(nèi)wo7iumDcnshqnsuHPLC98%,20mg/

黃華減 Thermopsine 486-90-8 20mg HPLC98% 用于含量測定

標(biāo)準(zhǔn)試劑庚烷磺酸鈉/

Soyasapogenol A大豆甾醇A純度:>98%
22630-25-7 錄本那敏相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品USP雜質(zhì)對(duì)照品(N/A) 10mg

Kopsia yunnanensis none 888482-17-5 C23H26N2O6 97% 葡甲安 - 對(duì)照譜圖(Y0000267

Tranexamic Acid 安甲環(huán)酸標(biāo)準(zhǔn)品1197-18-8 200mg

萬乃洛韋相關(guān)物質(zhì)F標(biāo)準(zhǔn)品86150-61-0 25mg

酸棗仁皂苷A 55466-04-1 HPLC98%;20mg 訂購|咨詢
非洲馬鈴果Voacanga africana Tubotaiwine none 6711-69-9 C20H24N2O2 95%

異綠原醋AcISOchlorogqnicccid420-23-220mg

西伯利亞遠(yuǎn)志糖A5 Sibiricose A5 107912-97-0 20mg HPLC98% 用于含量測定

標(biāo)準(zhǔn)品*140604-200623供*效價(jià)測定用

10-脫乙酰基巴卡丁III Deacetylbaccatin III 32981-86-5 20mg HPLC98% 用于含量測定
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