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線粒體膜蛋白提取試劑盒100T實驗方法儲存條件：蛋白提取液2-8℃保存；蛋白溶解液室溫保存；蛋白酶抑制劑-20℃保存。

有效期：一年。

產(chǎn)品簡介：

線粒體膜蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種原代或傳代細胞和各種實體組織，如腦、脊髓、神經(jīng)結(jié)或纖維、脂肪、肝臟、消化道、腎臟、心臟、肌肉、血管、結(jié)締組織等哺乳動物組織中提取線粒體膜蛋白。提取過程簡單方便。制備的線粒體膜蛋白不僅純度高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。提取的蛋白可用于WesternBlotting、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gelshift凝膠阻滯實驗、免疫共沉淀、酶活性測定等蛋白研究。

線粒體膜蛋白提取試劑盒100T實驗方法實驗操作步驟：
1、液的配制：
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ，其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推；對于細胞懸液每50～100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 （200×），按照每50μL JC-1（200×）加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液（5 ×），混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置：
    把試劑盒中提供的CCCP（10mM ）*按照1 ∶1000 的比例加入到細胞培養(yǎng)液中，稀釋至10uM ，處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ，進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細胞，通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失，JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光；而正常的細胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細胞，CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同，需自行參考相關(guān)文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞：
（1）取 10～60 萬細胞，重懸于 0.5mL 細胞培養(yǎng)液中，細胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
（2）加入 0.5mL JC-1 染色工作液，顛倒數(shù)次混勻。細胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
（3）在孵育期間，按照每 1mL JC-1 染色緩沖液（5×）加入 4mL 蒸餾水的比例，配制適量的JC-1 染色緩沖液（1×），并放置于冰浴。
（4）37℃孵育結(jié)束后，600g 4 ℃離心3 ～4 分鐘，沉淀細胞。棄上清，注意盡量不要吸除細胞。
（5）用JC-1 染色緩沖液（1×）洗滌 2 次：加入 1mL JC-1 染色緩沖液（1×）重懸細胞，600g 4 ℃離心3～4 分鐘，沉淀細胞，棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液（1×）重懸細胞，600g 4 ℃離心 3～4 分鐘，沉淀細胞，棄上清。
（6）再用適量 JC-1 染色緩沖液（1×）重懸后，用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察，也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
線粒體膜蛋白提取試劑盒100T實驗方法注意事項
（1）本試劑只適用于實驗，不適用于臨床檢測；
（2）PI（propidium iodide，碘化丙錠）有毒性，能通過皮膚吸收，對眼睛有刺激作用，使用時需戴手套；
（3）Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì)，在操作時請注意避光。在處理和標記時，盡可能在暗處進行。在孵育階段，用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后，在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察；
（4）整個操作過程動作要盡量輕柔，勿用力吹打細胞，盡量在4℃下操作，以免影響細胞狀態(tài)。
（5）在細胞洗滌的后一步，請盡量將上清棄凈，以免PBS殘留，有可能會影響實驗結(jié)果。
（6）為防止熒光衰變，宜在1小時內(nèi)進行流式檢測。
（7）PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高，建議首*行Annexin V-FITC染色，短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
吳茱萸Evodia rutaecarpa Stigmastane-3β,5α,6β-triol 豆甾烷-3,5,6-三醇 20835-91-0 C29H52O3 ≥98%

硫辛醋Lipoicccid20mg/支

葒草苷;葒草素 Orientin 28608-75-5 20mg HPLC≥98% 用于含量測定

對照品琥乙*0425-200002檢查

Licoricesaponin H2 (Liquiritinic acid diglucoside)二葡萄糖苷酸純度：>98%
2152-44-5 戊酸*標準品 200mg

金絲桃苷;槲皮速-3-半乳糖甙Hyperin;quercetin-3-galactoside48-36-0HPLC≥98%,20mg/支

Panaxydiol 1,8-十七碳二烯-4,6-二炔-3,10-二醇 63910-76-9

Troleandomycin*三乙酸酯標準品2751-9-9250mg

莫諾本宗 103-16-2 HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
闊帶鳳丫蕨Coniogramme maxima Pterosin D 蕨素 D 34169-70-5 C15H20O3 ≥98%

異數(shù)李速-3-O-新*Isorhcmnqtin-3-O-nqwhqspqridin20mg/支

靈芝酸D Ganoderic acid D 108340-60-9 20mg HPLC≥98% 本品用于含量測定

中藥對照藥材小薊121436-200501TLC法鑒別

alpha-metxyl-L(+)-tryptophan相思豆堿純度：95%
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