細(xì)胞核蛋白提取試劑盒100T實驗方法使用注意事項
1．微量試劑取用前請離心集液。
2．7-AAD避光保存及使用。
3．7-AAD為潛在致癌物，操作時請采取防護措施，穿*、戴手套等。
4．本試劑盒適用于檢測活細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測時，細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105，，不*用于檢測組織樣本。
產(chǎn)品名稱：細(xì)胞核蛋白提取試劑盒100T實驗方法
產(chǎn)品簡介：

核蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種原代或傳代細(xì)胞中提取核蛋白。提取過程簡單方便，可在1小時內(nèi)完成。制備的核蛋白不僅純度高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。提取的蛋白可用于Western Blotting、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實驗、免疫共沉淀、酶活性測定等蛋白研究。

細(xì)胞核蛋白提取試劑盒100T實驗方法操作方法
1．懸浮細(xì)胞離心（2000rpm離心5min）收集；貼壁細(xì)胞用*消化收集用PBS洗滌細(xì)胞二次（2000rpm離心5min）收集1~5×105細(xì)胞；
2．加入5μL 7-AAD染液，混勻；室溫、避光、反應(yīng)5～15min；
3．加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細(xì)胞；
4．請在1 hour內(nèi)，進行下述熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的觀察和檢測。
A．熒光顯微鏡觀察
1．滴一滴上述染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上，并用蓋玻片蓋上細(xì)胞；
2．對于貼壁細(xì)胞來說，也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；
（1）將細(xì)胞于蓋玻片上生長，用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并設(shè)立陰性對照組；
（2）用PBS洗滌細(xì)胞兩次；
（3）在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液，混勻；
（4）將上述溶液滴加于蓋玻片表面，使長有細(xì)胞的蓋玻片表面均勻覆蓋；
（5）避光、室溫反應(yīng)5 min。
3．將蓋玻片倒置于載玻片上，于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長546nm，發(fā)射波長647 nm，7-AAD熒光信號呈紅色。
B．流式細(xì)胞儀分析
用流式細(xì)胞儀檢測，激發(fā)波長Ex=546 nm; 發(fā)射波長Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測。
細(xì)胞核蛋白提取試劑盒100T實驗方法實驗步驟
貼壁細(xì)胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細(xì)胞。在消化時可加2％的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時，注意必須*清除EDTA：在標(biāo)記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌，清除EDTA，以免殘余的EDTA與Ca2＋螯合，影響Annexin V的結(jié)合。
（1）用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer；
（2）細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集：離心5分鐘；貼壁細(xì)胞：用不含EDTA的*消化收集后（注：*消化時間不宜過長，否則會影響細(xì)胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合），于室溫2000rpm離心5～10分鐘，收集細(xì)胞；
（3）細(xì)胞洗滌：用預(yù)冷1×PBS（4℃）重懸細(xì)胞一次，2000rpm離心5～10分鐘，洗滌細(xì)胞；
（4）加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞；
（5）Annexin V-FITC標(biāo)記：加入5μL的Annexin V-FITC混勻后，避光，室溫孵育15分鐘；
（6）PI標(biāo)記：上機前5分鐘再加入5μL的PI染色。
（7）上機前，補加200μL的1×Binding Buffer。
白屈菜 Chelidonium majus L. Sanguinarine 血根堿 2447-54-3 C20H14NO4+ ≥98%

高三尖杉酯減HomohcrringtoninqHPLC≥98%,20mg/支

茶減 Theophylline 58-55-9 20mg HPLC≥98% 用于含量測定

HPLC法含量測定鹽酸布替奈芬100681-200501常溫，避光100mg

Ibuprofen *標(biāo)準(zhǔn)品15687-27-1 750mg
160337-95-1 *標(biāo)準(zhǔn)品(NA) 15mg

高麗槐速;馬卡因GaoLihuai;maackiain19908-48-6HPLC≥98%,20mg/支

LaMiide LAMIIDE 27856-54-8

噻嘧啶相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品25mg噻嘧啶相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品

5,6-二甲基呫噸酮-4-乙酸 117570-53-3 HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
黃連堿 Coptisine (≥98%,HPLC) 3486-66-6 20MG 標(biāo)準(zhǔn)品

余甘子Phyllanthus emblica 算盤子二醇 6610-56-6 C30H50O2 ≥97.5% 胡黃連苦甙 I168195

Sesamin芝麻素607-80-720mg/支

Oxymetxolone CIII羥甲稀龍標(biāo)準(zhǔn)品434-07-1 200mg

長春花 Catharanthus roseus (L.)G.Don Catharanthine 長春質(zhì)堿 2468-21-5 C21H24N2O2 ≥98%
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