我司細(xì)胞跨膜蛋白提取試劑盒50T實(shí)驗(yàn)方法本著標(biāo)準(zhǔn)*、質(zhì)量*、服務(wù)*、信譽(yù)*的宗旨，為客戶提供輕松便捷，安全可靠的網(wǎng)上采購模式！我們將竭誠為您服務(wù),咨詢！
細(xì)胞跨膜蛋白提取試劑盒50T實(shí)驗(yàn)方法產(chǎn)品簡介：

哺乳動物跨膜蛋白承擔(dān)各種生物功能，在疾病的發(fā)生、發(fā)展過程中扮演重要角色?？缒さ鞍讟悠返闹苽湫枰浞挚紤]到與下游的膠分析及質(zhì)譜分析等應(yīng)用配套，因此跨膜蛋白樣本制備成為一個難以逾越的挑戰(zhàn)。傳統(tǒng)制備跨膜蛋白樣品的方法是使用去污劑和表面活性劑增溶。去污劑處理會使跨膜蛋白喪失其天然結(jié)構(gòu)，因而妨礙了跨膜蛋白的功能研究。 細(xì)胞跨膜蛋白提取試劑盒是一種基于化學(xué)而非去污劑方法的高產(chǎn)跨膜蛋白提取試劑盒。

細(xì)胞跨膜蛋白提取試劑盒50T實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)操作步驟：
1、液的配制：
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ，其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推；對于細(xì)胞懸液每50～100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 （200×），按照每50μL JC-1（200×）加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液（5 ×），混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置：
    把試劑盒中提供的CCCP（10mM ）*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中，稀釋至10uM ，處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ，進(jìn)行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細(xì)胞，通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失，JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光；而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細(xì)胞，CCCP 的作用濃度和作用時(shí)間可能有所不同，需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對于懸浮細(xì)胞：
（1）取 10～60 萬細(xì)胞，重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中，細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
（2）加入 0.5mL JC-1 染色工作液，顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
（3）在孵育期間，按照每 1mL JC-1 染色緩沖液（5×）加入 4mL 蒸餾水的比例，配制適量的JC-1 染色緩沖液（1×），并放置于冰浴。
（4）37℃孵育結(jié)束后，600g 4 ℃離心3 ～4 分鐘，沉淀細(xì)胞。棄上清，注意盡量不要吸除細(xì)胞。
（5）用JC-1 染色緩沖液（1×）洗滌 2 次：加入 1mL JC-1 染色緩沖液（1×）重懸細(xì)胞，600g 4 ℃離心3～4 分鐘，沉淀細(xì)胞，棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液（1×）重懸細(xì)胞，600g 4 ℃離心 3～4 分鐘，沉淀細(xì)胞，棄上清。
（6）再用適量 JC-1 染色緩沖液（1×）重懸后，用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察，也可以用熒光分光光度計(jì)檢測或流式細(xì)胞儀分析。
細(xì)胞跨膜蛋白提取試劑盒50T實(shí)驗(yàn)方法注意事項(xiàng)
（1）本試劑只適用于實(shí)驗(yàn)，不適用于臨床檢測；
（2）PI（propidium iodide，碘化丙錠）有毒性，能通過皮膚吸收，對眼睛有刺激作用，使用時(shí)需戴手套；
（3）Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì)，在操作時(shí)請注意避光。在處理和標(biāo)記時(shí)，盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段，用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后，在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察；
（4）整個操作過程動作要盡量輕柔，勿用力吹打細(xì)胞，盡量在4℃下操作，以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
（5）在細(xì)胞洗滌的后一步，請盡量將上清棄凈，以免PBS殘留，有可能會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
（6）為防止熒光衰變，宜在1小時(shí)內(nèi)進(jìn)行流式檢測。
（7）PI染色時(shí)間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高，建議首*行Annexin V-FITC染色，短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
桑Morus alba Sanggenol P 桑根酮醇 P 1351931-30-0 C30H36O6 ≥97%

石榴皮鞣速PomqgrcnctqskintcnningqlqmqntHPLC≥98%;10mg/支

梣同;岑同 Fraxinellone 28808-62-0 20mg HPLC≥98% 用于含量測定

HPLC法含量測定*100679-200401常溫，避光50mg

Bumetanide*標(biāo)準(zhǔn)品28395-03-1250mg
158401-51-5 *相關(guān)物質(zhì)D標(biāo)準(zhǔn)品 25mg

長春花 Catharanthus roseus (L.)G.Don 長春質(zhì)減 2468-21-5 C21H24N2O2 ≥98% 間本三酚(Y00009

撲草凈標(biāo)準(zhǔn)品 毒草安標(biāo)準(zhǔn)品 霜每危標(biāo)準(zhǔn)品

Quazepam Related Compound A夸西泮相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品30mg夸西泮相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品

表告依春 1072-93-1 HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
338-98-7 乙酸異扶潑尼龍標(biāo)準(zhǔn)品 200mg

魚子蘭Chloranthus elatior 4,10-香木蘭烷二醇 70051-38-6 C15H26O2 ≥95% 柚皮素查耳同12075

Torilin 13018-10-5

Levamisole xy7nochloride 鹽酸咪唑標(biāo)準(zhǔn)品16595-80-5 125mg

*皂苷I HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
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