糖蛋白富集試劑盒100T實(shí)驗(yàn)方法使用注意事項(xiàng)
1．微量試劑取用前請(qǐng)離心集液。
2．7-AAD避光保存及使用。
3．7-AAD為潛在致癌物，操作時(shí)請(qǐng)采取防護(hù)措施，穿*、戴手套等。
4．本試劑盒適用于檢測(cè)活細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)，細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105，，不*用于檢測(cè)組織樣本。
產(chǎn)品名稱：糖蛋白富集試劑盒100T實(shí)驗(yàn)方法
產(chǎn)品簡介：

糖蛋白富集試劑盒可以選擇性的對(duì)糖蛋白和多肽進(jìn)行富集和純化。本試劑盒可以用來提取富集哺乳動(dòng)物細(xì)胞、組織、細(xì)菌、酵母、植物等樣本的的糖蛋白。 經(jīng)本試劑盒制備的蛋白樣品可用于Western blotting, mass spectrometry, 2D-PAGE 和protein arrays等下游應(yīng)用。

糖蛋白富集試劑盒100T實(shí)驗(yàn)方法操作方法
1．懸浮細(xì)胞離心（2000rpm離心5min）收集；貼壁細(xì)胞用*消化收集用PBS洗滌細(xì)胞二次（2000rpm離心5min）收集1~5×105細(xì)胞；
2．加入5μL 7-AAD染液，混勻；室溫、避光、反應(yīng)5～15min；
3．加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細(xì)胞；
4．請(qǐng)?jiān)?/span>1 hour內(nèi)，進(jìn)行下述熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的觀察和檢測(cè)。
A．熒光顯微鏡觀察
1．滴一滴上述染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上，并用蓋玻片蓋上細(xì)胞；
2．對(duì)于貼壁細(xì)胞來說，也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；
（1）將細(xì)胞于蓋玻片上生長，用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并設(shè)立陰性對(duì)照組；
（2）用PBS洗滌細(xì)胞兩次；
（3）在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液，混勻；
（4）將上述溶液滴加于蓋玻片表面，使長有細(xì)胞的蓋玻片表面均勻覆蓋；
（5）避光、室溫反應(yīng)5 min。
3．將蓋玻片倒置于載玻片上，于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長546nm，發(fā)射波長647 nm，7-AAD熒光信號(hào)呈紅色。
B．流式細(xì)胞儀分析
用流式細(xì)胞儀檢測(cè)，激發(fā)波長Ex=546 nm; 發(fā)射波長Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測(cè)。
糖蛋白富集試劑盒100T實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)步驟
貼壁細(xì)胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細(xì)胞。在消化時(shí)可加2％的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時(shí)，注意必須*清除EDTA：在標(biāo)記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌，清除EDTA，以免殘余的EDTA與Ca2＋螯合，影響Annexin V的結(jié)合。
（1）用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer；
（2）細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集：離心5分鐘；貼壁細(xì)胞：用不含EDTA的*消化收集后（注：*消化時(shí)間不宜過長，否則會(huì)影響細(xì)胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合），于室溫2000rpm離心5～10分鐘，收集細(xì)胞；
（3）細(xì)胞洗滌：用預(yù)冷1×PBS（4℃）重懸細(xì)胞一次，2000rpm離心5～10分鐘，洗滌細(xì)胞；
（4）加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞；
（5）Annexin V-FITC標(biāo)記：加入5μL的Annexin V-FITC混勻后，避光，室溫孵育15分鐘；
（6）PI標(biāo)記：上機(jī)前5分鐘再加入5μL的PI染色。
（7）上機(jī)前，補(bǔ)加200μL的1×Binding Buffer。
丹參 Salvia miltiorrhiza Bge. Salvianolic acid A 丹酚酸A 96574-01-5 C26H22O10 ≥98%

木香烴內(nèi)酯Costunolidq20mg/支

補(bǔ)骨脂酚;破故紙酚 Backuchiol 10309-37-2 20mg HPLC≥98% 用于含量測(cè)定

含量測(cè)定* 100674-200301常溫，避光100mg

殘留溶劑第1類標(biāo)準(zhǔn)品1.2ml×3ampules
156-54-7 丁酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品 25mg

木通本醇苷BCalceolariosideB102471-98-220mg

5-xy7noxy-1,7-dipxenyl-6-hepten-3-one [R-(E)]-5-輕基-1,7-二本基-6-庚烯-3-同 87095-74-7

metxyl Caprylate 辛酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品111-11-5 300mg辛酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品

廣防風(fēng)苷A;Epimeredinosid 20mg 訂購|咨詢
54643-79-7 *相關(guān)物質(zhì)D標(biāo)準(zhǔn)品 25mg

魚子蘭Chloranthus elatior none 1372558-36-5 C15H18O5 ≥95% 硬酯酸甲酯C18(M1770200

二甲噻草安標(biāo)準(zhǔn)品 甜菜安標(biāo)準(zhǔn)品 丁迷脲標(biāo)準(zhǔn)品

可移植皮參考顯微照片標(biāo)準(zhǔn)品ea可移植皮參考顯微照片標(biāo)準(zhǔn)品

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