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活性氧(ROS)檢測試劑盒DCFHDA200T免費代測

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更新時間:2017-07-03 14:53:38瀏覽次數:389次

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產品名稱:活性氧(ROS)檢測試劑盒DCFHDA200T免費代測
儲存條件:-20℃保存。

有效期:一年。

產品簡介:

活性氧(Reactiveoxygenspecies,ROS)包括超氧自由基、過氧化氫、及其下游產物過氧化物和羥化物等,參與細胞生長增殖、發(fā)育分化、衰老和凋亡以及許多和病理過程。

活性氧檢測試劑盒是一種利用熒光探針DCFH-DA 進行活性氧檢測的試劑盒。DCFH-DA 本身沒有熒光,可以自由穿過細胞膜,進入細胞內后,可以被細胞內的酯酶水解生成DCFH。而DCFH 不能通透細胞膜,從而使探針很容易被標記到細胞內。在活性氧存在的條件下,DCFH 被氧化生成熒光物質DCF,綠色熒光強度與細胞內活性氧水平成正比,檢測DCF 的熒光就可以知道細胞內活性氧的水平。在激發(fā)波長502 nm,發(fā)射波長530 nm 附近,使用熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡、熒光分光光度計、熒光酶標儀、流式細胞儀等檢測DCF 熒光,從而測定細胞內活性氧水平。

活性氧(ROS)檢測試劑盒DCFHDA200T免費代測使用注意事項
1.微量試劑取用前請 離心集液。
27-AAD避光保存及使用。
37-AAD為潛在致癌物,操作時請采取防護措施,穿*、戴手套等。
4.本試劑盒適用于檢測活細胞,流式細胞儀檢測時,細胞數量不以應低于1×105,,不*用于檢測組織樣本。
活性氧(ROS)檢測試劑盒DCFHDA200T免費代測操作方法
1.懸浮細胞離心(2000rpm離心5min)收集;貼壁細胞用*消化收集用PBS洗滌細胞二次(2000rpm離心5min)收集1~5×105細胞;
2.加入5μL 7-AAD染液,混勻;室溫、避光、反應515min;
3.加入500μL1×Assays Buffer懸浮細胞;
4.請在1 hour內,進行下述熒光顯微鏡或流式細胞儀的觀察和檢測。
A.熒光顯微鏡觀察
1.滴一滴上述染色后的細胞懸液于載玻片上,并用蓋玻片蓋上細胞;
2.對于貼壁細胞來說,也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細胞并誘導細胞凋亡;
1)將細胞于蓋玻片上生長,用適當的凋亡誘導劑誘導細胞凋亡,并設立陰性對照組;
2)用PBS洗滌細胞兩次;
3)在500μL 1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液,混勻;
4)將上述溶液滴加于蓋玻片表面,使長有細胞的蓋玻片表面均勻覆蓋;
5)避光、室溫反應5 min。
3.將蓋玻片倒置于載玻片上,于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長546nm,發(fā)射波長647 nm,7-AAD熒光信號呈紅色。
B.流式細胞儀分析
用流式細胞儀檢測,激發(fā)波長Ex=546 nm; 發(fā)射波長Em=647 nm
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測。
活性氧(ROS)檢測試劑盒DCFHDA200T免費代測實驗步驟
貼壁細胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細胞。在消化時可加2%的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時,注意必須*清除EDTA:在標記前用1×PBS1×bindingbuffer洗滌,清除EDTA,以免殘余的EDTACa2+螯合,影響Annexin V的結合。
1)用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer;
2)細胞收集。懸浮細胞收集:離心5分鐘;貼壁細胞:用不含EDTA的*消化收集后(注:*消化時間不宜過長,否則會影響細胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結合),于室溫2000rpm離心510分鐘,收集細胞;
3)細胞洗滌:用預冷1×PBS4)重懸細胞一次,2000rpm離心510分鐘,洗滌細胞;
4)加入300μL 1×Binding Buffer 懸浮細胞;
5Annexin V-FITC標記:加入5μLAnnexin V-FITC混勻后,避光,室溫孵育15分鐘;
6PI標記:上機前5分鐘再加入5μLPI染色。
7)上機前,補加200μL1×Binding Buffer。
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4-拂本酚;隊拂本酚;隊羌基拂本 4-Fluorophqnol;p-Fluorophqnol;p-xy7noxyfluorobqnzqnq 371-41-2

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一鹽酸奎寧 Quinine hydrochloride dihydrate,99.0% 6119-47-7 5G 表面活性劑

N,N-二基醇安(XZ) N,N-Dimqthylqthcnolcminq 108

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