當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細胞生物學(xué)試劑>>細胞氧化應(yīng)激>> 丙二醛(MDA)檢測試劑盒100T實驗方法
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更新時間:2017-07-03 14:51:22瀏覽次數(shù):302次
聯(lián)系我時,請告知來自 儀表網(wǎng)丙二醛(MDA)檢測試劑盒100T實驗方法使用注意事項
1.微量試劑取用前請離心集液。
2.7-AAD避光保存及使用。
3.7-AAD為潛在致癌物,操作時請采取防護措施,穿*、戴手套等。
4.本試劑盒適用于檢測活細胞,流式細胞儀檢測時,細胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105,,不*用于檢測組織樣本。
產(chǎn)品名稱:丙二醛(MDA)檢測試劑盒100T實驗方法
儲存條件:2-8℃避光保存。
有效期:一年。
產(chǎn)品簡介:
機體通過酶系統(tǒng)與非酶系統(tǒng)產(chǎn)生氧自由基,后者能攻擊生物膜中的多不飽和脂肪酸(polyunsaturatedfattyacid,PUFA),引發(fā)脂質(zhì)過氧化作用,并因此形成脂質(zhì)過氧化物。如:醛基(丙二醛MDA)、酮基、羥基、羰基、氫過氧基或內(nèi)過氧基,以及新的氧自由基等。脂質(zhì)過氧化作用不僅把活性氧轉(zhuǎn)化成活性化學(xué)劑,即非自由基性的脂類分解產(chǎn)物,而且通過鏈式或鏈式支鏈反應(yīng),放大活性氧的作用。因此,初始的一個活性氧能導(dǎo)致很多脂類分解產(chǎn)物的形成,這些分解產(chǎn)物中,一些是無害的,另一些則能引起細胞代謝及功能障礙,甚至死亡。氧自由基不但通過生物膜中多不飽和脂肪酸(PUFA)的過氧化引起細胞損傷,而且還能通過脂氫過氧化物的分解產(chǎn)物引起細胞損傷。因而測試MDA的量常常可反映機體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的程度,間接地反映出細胞損傷的程度。MDA的測定常常與SOD的測定相互配合,SOD活力的高低間接反應(yīng)了機體清除氧自由基的能力,而MDA的高低又間接反應(yīng)了機體細胞受自由基攻擊的嚴重程度。
丙二醛(MDA)檢測試劑盒100T實驗方法操作方法
1.懸浮細胞離心(2000rpm離心5min)收集;貼壁細胞用*消化收集用PBS洗滌細胞二次(2000rpm離心5min)收集1~5×105細胞;
2.加入5μL 7-AAD染液,混勻;室溫、避光、反應(yīng)5~15min;
3.加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細胞;
4.請在1 hour內(nèi),進行下述熒光顯微鏡或流式細胞儀的觀察和檢測。
A.熒光顯微鏡觀察
1.滴一滴上述染色后的細胞懸液于載玻片上,并用蓋玻片蓋上細胞;
2.對于貼壁細胞來說,也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細胞并誘導(dǎo)細胞凋亡;
(1)將細胞于蓋玻片上生長,用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細胞凋亡,并設(shè)立陰性對照組;
(2)用PBS洗滌細胞兩次;
(3)在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液,混勻;
(4)將上述溶液滴加于蓋玻片表面,使長有細胞的蓋玻片表面均勻覆蓋;
(5)避光、室溫反應(yīng)5 min。
3.將蓋玻片倒置于載玻片上,于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長546nm,發(fā)射波長647 nm,7-AAD熒光信號呈紅色。
B.流式細胞儀分析
用流式細胞儀檢測,激發(fā)波長Ex=546 nm; 發(fā)射波長Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測。
丙二醛(MDA)檢測試劑盒100T實驗方法實驗步驟
貼壁細胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細胞。在消化時可加2%的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時,注意必須*清除EDTA:在標記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌,清除EDTA,以免殘余的EDTA與Ca2+螯合,影響Annexin V的結(jié)合。
(1)用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer;
(2)細胞收集。懸浮細胞收集:離心5分鐘;貼壁細胞:用不含EDTA的*消化收集后(注:*消化時間不宜過長,否則會影響細胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合),于室溫2000rpm離心5~10分鐘,收集細胞;
(3)細胞洗滌:用預(yù)冷1×PBS(4℃)重懸細胞一次,2000rpm離心5~10分鐘,洗滌細胞;
(4)加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細胞;
(5)Annexin V-FITC標記:加入5μL的Annexin V-FITC混勻后,避光,室溫孵育15分鐘;
(6)PI標記:上機前5分鐘再加入5μL的PI染色。
(7)上機前,補加200μL的1×Binding Buffer。
垂盆草Sedum sarmentosum Sarmentosin 垂盆鈔草甙(治肝炎藥),垂盆草甙 71933-54-5 C11H17NO7 ≥95%
升麻速Cimifugin20mg/支
柴胡皂苷C;柴胡皂甙C Saikosaponin C 20736-08-7 20mg HPLC≥98% 用于含量測定
含量測定*100686-200401常溫,避光100mg
*相關(guān)物質(zhì)B標準品15883-20-250mg
165450-17-9 紐甜標準品 200mg
靛藍Indigo48-89-320mg
Secoisolariciresinol 開環(huán)異落葉松樹脂酚 29388-59-8
Benoxinate xy7nochloride*標準品5987-82-6200mg*標準品
* E ;cucurbitacin 18444-66-1 10mg 訂購|咨詢
結(jié)香花Edgeworthia chrysantha Lindl Tiliroside 銀鍛苷 20316-62-5 C30H26O13 ≥98%
右旋龍腦D-bornqol207-70-020mg
毛地黃素 Digitaline 20mg HPLC≥98% 用于含量測定
對照品*S130539-200301系統(tǒng)適應(yīng)性
2,3,5,4-四羥基二本葡萄糖苷;何首烏苷 2,3,5,4-tetraxy7noxyl dipxenyletxylene-2-o-glucoside 82373-94-2 20mg HPLC≥98% 暫無簡介
細菌總數(shù)顯色培養(yǎng)基shēng huà shì jì容量:50張/盒
聚氧丙烯聚氧共聚物Polyetxylene-polypropylene glycol
甲氧基鈉,英文名或英文縮寫:wo7ium metxoxide,級別:BR,99%,規(guī)格:1克
孟加拉紅培養(yǎng)基 Rose Bengal Medium Null 250G 培養(yǎng)基
二基鋅(約1mol/L的己烷溶液) Diqthylzinc 227-0-0
4-基本以酮shēng huà shì jì容量:500ul*100支
蔗糖 Sucrosq(100Mg) 27-20-1
2,3-Dichloropyridine-4-boronic acid 951677-39-7
* Theophylline (≥98%,HPLC) 58-55-9 50MG 標準品
L-色酸/L-胰化蛋白基酸/L-色基酸/L-2-基-3-吲哚基-1-丙酸/L-基吲哚丙酸/L-Tryptophan BR,99% 10克 國產(chǎn)/進口
丙二醛(MDA)檢測試劑盒100T實驗方法RNASEINHIBITOR*CLDPAK*RNase抑制劑生物技術(shù)級10KUCOLD
79-19-6硫代基脲;基硫脲;硫脲ThioseMicarbazide;HydrcarbothioaMide
4-nitnoaniline4-硝基本胺25克BS
一氧化錳 Manganese monoxide 1344-43-0 100G 通用試劑
六溴環(huán)十二烷 1,2,5,6,9,10-Hexabromocyclododecane,95% 3194-55-6 25G 通用試劑
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