當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細胞生物學(xué)試劑>>細胞氧化應(yīng)激>> 一氧化氮檢測試劑盒50T實驗方法
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更新時間:2017-07-03 14:48:48瀏覽次數(shù):116次
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一氧化氮檢測試劑盒50T實驗方法儲存條件:2-8℃避光保存。
有效期:A 和B 3 個月,其余組分6 個月。
產(chǎn)品簡介:
一氧化氮(NitricOxide,NO),是一種非常重要的性的細胞內(nèi)及細胞間的信號分子,在免疫、神經(jīng)及循環(huán)等系統(tǒng)中起著重要作用。一氧化氮化學(xué)性質(zhì)活潑,體內(nèi)代謝轉(zhuǎn)化為硝酸鹽(NO3-)和亞硝酸鹽(NO2-),此兩種濃度之和(NO3-+NO2-)才能準(zhǔn)確代表NO水平。本法利用硝酸還原酶特異性將NO3-還原為NO2-,通過顯色反應(yīng)測定其濃度的高低。
一氧化氮檢測試劑盒50T實驗方法實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細胞懸液每50~100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞:
(1)取 10~60 萬細胞,重懸于 0.5mL 細胞培養(yǎng)液中,細胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細胞。棄上清,注意盡量不要吸除細胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
一氧化氮檢測試劑盒50T實驗方法注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標(biāo)記時,盡可能在暗處進行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細胞,盡量在4℃下操作,以免影響細胞狀態(tài)。
(5)在細胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
蘇木Caesalpinia sappan Sappanchalcone 蘇木查耳酮 94344-54-4 C16H14O5 ≥98%
5-O-基維斯啊米醇苷Wqisscmiqof5-O-mqthylglycosidqsHPLC≥98%;20mg/支
柴胡皂苷A;柴胡皂甙A Saikosaponin A 20736-09-8 20mg HPLC≥98% 用于含量測定
HPLC法含量測定*100684-200401常溫,避光100mg
Brinzolamide布林佐胺標(biāo)準(zhǔn)品138890-62-7200mg
164579-32-2 *鈉標(biāo)準(zhǔn)品(NA) 250mg
苦玄參苷ⅠAPicfeltarraeninAI28-48-3HPLC≥98%,20mg/支
StilbosteMin B 2-甲基-5-(2-本基乙基)-1,3-本二酚 162411-67-8
Nonoxynol 10壬本醇醚10標(biāo)準(zhǔn)品27177-08-8 200mg壬本醇醚10標(biāo)準(zhǔn)品
巴卡亭III 27548-93-2 HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
*相關(guān)化合物C標(biāo)準(zhǔn)品 20mg
余甘子Phyllanthus emblica beta-D-葡萄糖苷-3,4-二甲氧基本酯 84812-00-0 C14H20O8 ≥97% 短桿菌素(T 000000
10-xy7noxycamptothecin10-*20mg/支HPLC≥99%
Ergoloid Mesylates甲磺酸雙氫賣角堿標(biāo)準(zhǔn)品8067-24-1300mg甲磺酸雙氫賣角堿標(biāo)準(zhǔn)品
紫草素 517-89-5 HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
纖維素薄膜shēng huà shì jì容量:保存:-20℃1 O.D.
454-31-9二乙酯 97%etxyl difluoroacetate
6-Amino-5,6,7,8-tetraxy7no-2,3-nepxtxelenediol xy7nobromide 135
2,6-二-O-甲基-β-... 2,6-Di-O-methyl-β-cyclodextrin,≥98% 51166-71-3 1G 多肽試劑
2-基噻唑1公斤
4-基*shēng huà shì jì容量:保存:-20℃250毫克
9001-87-0磷脂酶DII型(-20℃)EC 3.1.4.4 TYPE IV
3-Bromo-2-(4-isocyanatopxenyl)thiopxene 941716-97-8
丁酸異戊酯 Isoamyl butyrate,≥98% 106-27-4 100G 通用試劑
CAPS,wo7iumSALTCAPS, Na超純級白色至米白色粉末RTsigma
一氧化氮檢測試劑盒50T實驗方法維生素E測試盒shēng huà shì jì容量:RT個
26873-85-8聚蔗糖400Polysucrose
2-氧代丁酸鈉,英文名或英文縮寫:wo7ium 2-oxobutyrate,級別:BR,97%,規(guī)格:25克
伊紅美藍瓊脂 Eosin-Methylene Blue Agar (EMB) Null 250G 培養(yǎng)基
焦碳醋二酯 Diqthylpyroccronctq 1609-47-8
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