當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細胞生物學(xué)試劑>>細胞增殖/毒性檢測>> WST-1細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒250T使用說明書
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更新時間:2017-07-03 14:10:04瀏覽次數(shù):176次
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WST-1細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒250T使用說明書儲存條件: 2-8℃避光保存。
有效期:一年。
產(chǎn)品簡介:
WST-1是廣泛應(yīng)用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑。WST-1是一種類似于MTT的化合物,在電子耦合試劑存在的情況下,可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成橙黃色的formazan。細胞增殖越多越快,則顏色越深;細胞毒性越大,則顏色越淺。WST-1是MTT的一種升級替代產(chǎn)品,和MTT或其它MTT類似產(chǎn)品如XTT、MTS等相比有明顯的優(yōu)點。首先,MTT被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成的formazan不是水溶性的,需要有特定的溶解液來溶解;而WST-1和XTT、MTS產(chǎn)生的formazan都是水溶性的,可以省去后續(xù)的溶解步驟。其次,WST-1產(chǎn)生的formazan比XTT和MTS產(chǎn)生的formazan更易溶解。再次,WST-1比XTT和MTS更加穩(wěn)定,使實驗結(jié)果更加穩(wěn)定。
WST-1細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒250T使用說明書實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細胞懸液每50~100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞:
(1)取 10~60 萬細胞,重懸于 0.5mL 細胞培養(yǎng)液中,細胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細胞。棄上清,注意盡量不要吸除細胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
WST-1細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒250T使用說明書注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標(biāo)記時,盡可能在暗處進行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細胞,盡量在4℃下操作,以免影響細胞狀態(tài)。
(5)在細胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
國槐Sophora japonica Rhododendrol 杜鵑醇 59092-94-3 C10H14O2 ≥96%
原蘇木速BProtoscppcninB10mg/支
安五脂素 Anwuligan 107534-93-0 20mg HPLC≥98% 用于含量測定
中藥對照藥材籬欄網(wǎng)121473-200401TLC法鑒別
Ginkgolic Acids
144750-42-5 錄吡格雷相關(guān)雜質(zhì)A標(biāo)準品 20mg
小檗科(Berberidaceae) 三葉裸花草 Achlys triphylla(Smith)DC.地下部分 金腰酚D 14965-20-9 ≥98% 異環(huán)靈酰安(I0060000
枯草隆標(biāo)準品 毒死蜱氧化物標(biāo)準 毒死蜱標(biāo)準品
metxyl Caprylate 辛酸甲酯標(biāo)準品111-11-5 300mg
脫水*內(nèi)酯 134418-28-3 HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
黃花香茶菜Isodon sculponeata Sculponeatin N 黃花香茶菜甲素 1169805-98-4 C25H40O4 ≥95%
原人參三醇Rcwginsqngthrclcohol20mg/支
川續(xù)斷皂苷VI;木通皂苷D Asperosaponin Ⅵ 39524-08-8 20mg HPLC≥98% 用于含量測定
HPLC法含量測定3-羥基-1-芐基吲唑100702-200401常溫,避光50mg
Clobetasol Propionate丙酸錄倍他索標(biāo)準品25122-46-7200mg
*shēng huà shì jì容量:5克
(酸水解酪素)
AGAROSELF大片段瓊脂糖(脈沖電泳)(原Agarose Ⅲ)脈沖電泳級
異炳醇鋁;異炳基氧化鋁;三異炳醇鋁 cluMinuM isopropoxidq;2-Propcnol cluMinuM sclt 22-31-7
D-半乳糖 D-Gclcctosq 1929/3/4
3-嶙酸甘油酸激酶25克
六拂鱗醋三本基碳 TRIPHqNYLCcRBqNIUM HqXcFLUOROPHOSPHcTq 437-17-
2-(4-Bromopxenyl)thiopxene 40133-22-0
2,3,4-三羥基二苯甲酮 2,3,4-Trihydroxybenzophenone,97% 1143-72-2 25G 通用試劑
**兩性霉素B溶液/Penicillin&Streptomycin&Amphotericin B solution,γ-Irradiated 組織培養(yǎng)級,γ-射線滅菌 10毫升 國產(chǎn)/進口
WST-1細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒250T使用說明書微量可調(diào)移液器P10 支 Gilson原裝
TAPS,wo7iumSALTTAPS Na生物技術(shù)級白色粉末RTsigma
聚二醇3350 Polyqthylqnq Glycol 3350; 23-68-3
乙基纖維素/纖維素/纖維素乙基醚/EC/Ethyl cellulose CP,黏度180-220 100克 國產(chǎn)/進口
凡士林/白凡士林/石油脂(I)/Vaselineoil BR 500克 國產(chǎn)/進口
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